ICS 67.120.10 CCS B 45 NY 中华人民共和国农业行业标 NY/T 3947—2021 畜禽肉中硒代胱氨酸、甲基硒代半胱 氨酸和硒代蛋氨酸的测定 高效液 相色谱一原子荧光光谱法 Determination of selenocystine, methylselenocysteine and selenotmethionine in livestock and poultry meat by high performance liquid chromatography-atomic fluorescence spectrometry 业标准信息服务平台 2021-11-09发布 2022-05-01实施 中华人民共和国农业农村部 S发布 NY/T3947—2021 全国农业全品标准 20001.4一2015《标准编写规则第4部分：试验方法标准》的规定起草 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部农产品质量安全监管司提出。 本文件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口。 本文件起草单位：江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所、农业农村部环境保护科研监测 所、江西省农业科学院微生物应用所、江西新农园实业有限公司。 本文件主要起草人：魏益华、张金艳、邱素艳、袁林峰、黄青青、张标金、袁丽娟、谢敏、聂根新、戴廷灿、 陈庆隆、董秋洪、陈柳萌、赵云、卢峰。 行业标准信息服务平台 NY/T 3947—2021 畜禽肉中硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸和硒代蛋氨酸的测定 高效液相色谱-原子荧光光谱法 1范围 本文件规定了畜禽肉中硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸和硒代蛋氨酸含量的高效液相色谱原子荧光 光谱测定方法。 本文件适用于猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉和鸭肉等备禽肉中硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸和硒代蛋氨酸 的测定。 2 规范性引用文件 RD 下列文件中的内容通过 中的规范# 用而构成本 其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用 期的用文件具 所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 永规格租售 分析 验方 S 3术语和定义 要界宇 本文件没有需 术语和定 UR 4原理 日 上硒代半胱氨酸和硒代蛋氨酸体蛋自酶水解提取，摄 试样中硒代胱 全超滤管离心净化， 色谱分 经反相离子对液相 CEI 5试剂和材料 特殊江 1为优级纯试剂水为符 以下所用试剂 主明外 合GBT6682 5.1试剂 5. 1. 1 甲醇(CHO) 色谱纯 5. 1. 2 甲酸（HCOOH 号 5. 1.3 盐酸（HCI,CAS 647-01-0 5. 1. 4 磷酸氢二铵[(NH)，HPO.CAS 8-28 5. 1.5 四丁基溴化铵（Cl6H36NBrCAS号：1643-192）：离子对色谱 服务平台 5. 1. 6 碘化钾（KI.CAS号：7681-11-0） 5. 1.7 氢氧化钾（KOH.CAS号：1310-58-3）。 5. 1.8 硼氢化钾（KBH，CAS号：13762-51-1）。 5. 1. 9 胰蛋白酶（CAS号：9002-07-7）：酶活力≥2500U/mg。 5.1.10蛋白酶（proteaseXIV.CAS号：9036-060）：酶活力≥3.5U/mg。 5.2试剂配制 5.2.1甲酸溶液（10%）：量取甲酸5.0mL.用水稀释定容至50mL。 5.2.2流动相（30mmol/L磷酸氢二铵，0.5mmol/L四丁基溴化铵，5%甲醇，pH6.0）：称取磷酸氢二铵 3.96g、四丁基溴化铵0.161g，置于1000mL量筒中，加人水900mL,搅勾，用甲酸溶液（5.2.1)调节溶液pH 至6.0，加人甲醇50ml，用水定容至刻度。经0.45um尼龙滤膜过滤后，于水浴超声脱气30min，备用。 1 NY/T3947—2021 5.2.3磷酸氢二铵溶液（30mmol/L磷酸氢二铵，pH8.0）：称取磷酸氢二铵3.96g，置于1000ml量筒 中.加人水950mL，用甲酸溶液（5.2.1）调节溶液pH至8.0用水定容至刻度。 5.2.4硼氢化钾溶液（25g/L)：取水950ml加人氢氧化钾5.0g，搅匀后加入硼氢化钾25.0g，搅匀后 用水稀释至1000mL。 5.2.5碘化钾溶液（2g/L)：取水950mL，加入氢氧化钾5.0g，搅匀溶解，加人碘化钾2.0g，搅匀溶解后 用水稀释至1000mL。 5.2.6盐酸溶液（10%）：取盐酸100mL，用水稀释至1000mL 5.2.7盐酸溶液（1%）：取盐酸1.0ml用水稀释至100ml。 5.3标准品 5.3.1硒代胱氨酸（C,H12N.O,Se2.CAS号：29621-88-3）：L型，纯度98%，或经国家认证并授予标准 物质证书的标准溶液。 5.3.2甲基硒代半胱氨酸（CH.NO2Se，CAS号：26046-90-2）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物 质证书的标准溶液。 5.3.3硒代蛋氨酸（C.HmNO,Se,CAS号：1464-42-2)：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书 的标准溶液。 5.4标准溶液配制 5.4.1硒代胱氨酸标准储备液（1000mg/L以Se计）：准确称取硒代胱氨酸标准品21.6mg，用盐酸溶 液（5.2.7）溶解并定容至10ml。于0℃～4℃冷藏保存，有效期为3个月。 5.4.2甲基硒代半胱氨酸标准储备液（1000mg/L，以Se计）：准确称取甲基硒代半胱氨酸标准品 23.5mg，用水溶解并定容至10mL。于0℃~4℃冷藏保存，有效期为3个月。 5.4.3硒代蛋氨酸标准储备液（1000mg/L，以Se计）：准确称取硒代蛋氨酸标准品25.3mg，用水溶解 并定容至10mL。于0℃～4℃冷藏保存，有效期为3个月。 5.4.4混合标准中间液（10.0mg/L，均以Se计）：准确量取硒代胱氨酸标准储备液（5.4.1）、甲基硒代半 铵溶液（5.2.3）定容，现用现配。 5.4.5混合标准使用液（0.50mg/L，均以Se计）：准确量取混合标准中间液（5.4.4）5.0mL于100mL 容量瓶中，用磷酸氢二铵溶液（5.2.3）定容，现用现配。 5.4.6混合标准工作液：分别量取混合标准使用液（5.4.5)0.50mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0ml 和5.0mL于50mL容量瓶中，用磷酸氢二铵溶液（5.2.3）稀释至刻度，摇匀。混合标准工作液浓度为 5μg/L、10ug/L、20μg/L、30μg/L、40μg/L和50ug/L的混合标准工作液，现用现配。 信息服务平台 5.5材料 5.5.1滤膜：尼龙，0.45μm。 5.5.2超滤离心管：15mL/3ku。 5.5.3一次性过滤器：聚偏氟乙烯，0.45μm。 5.5.4氩气或液氟：纯度≥99.99%。 6仪器设备 6.1高效液相色谱-原子荧光联用仪（HPLC-AFS)：由高效液相色谱仪、在线紫外处理系统和原子荧光光 谱仪组成。 6.2分析天平：感量0.0001g和0.001g。 6.3 pH计。 6.4均质器。 2