ICS65.020.01 CCS B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3948—2021 植物源农产品中叶黄素、玉米黄质、β- 隐黄质的测定 高效液相色谱法 Determination of lutein, zeaxanthin and β-cryptoxanthin in agricultural products of plant origin foods by high performance liquid chromatography 行业标准信息服务平台 2021-11-09发布 2022-05-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 3948—2021 信言 公共服务 食典通 本文件按照GB/T1.12020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件两结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部农产品质量安全监管司提出。 本文件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口。 本文件起草单位：北京市营养源研究所、农业农村部食物与营养发展研究所、内蒙古蒙牛乳业（集团） 股份有限公司、中国合格评定国家认可委员会、国家食品行业生产力促进中心、北京市理化分析测试中心、 国家蔬菜工程技术研究中心。 本文件主要起草人：崔亚娟、朱大洲、孔凡华、白沙沙、许洪高、屠振华、杨春雪、刘玉峰、罗欣、李东、赵 欣、杨志刚、马文丽、林立民、李宏、马杰、贾丽、刘光敏、王亚钦。 行业标准信息服务平台 NY/T3948—2021 植物源农产品中叶黄素、玉米黄质、β-隐黄质的测定 高效液相色谱法 1范围 本文件规定了植物源农产品中叶黄素、玉米黄质、β隐黄质的高效液相色谱测定方法。 本文件适用于植物源性初级农产品中叶黄素 2规范性引用文件 其中，注日期的引用文件， 手本文件不贝期的引 其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 仅该日期对应的版本适用 文件。 GB/T 6682 分析实验 3术语和定义 定心术 本文件没有需要界 和定 4原理 A 试样在碱性条件 水解使叶黄素、玉米黄质、β隐黄质完全水解为游 正已烷-环已烷 萃取，用具紫外检测器 器或 高效液相色增谱检测，外标法定量 5 试剂和材料 除非另有说明 5.1试剂 C 5.1.1氢氧化钾（ 5. 1. 2 无水硫酸钠 5.1.3 2.6二叔丁基 5. 1.4 无水乙醇（CH 5.1.5 环已烷（C,H12）。 5. 1.6 无水乙醚（CHO。 5. 1.7 正已烷（CH）。 5. 1.8 甲醇(CH,O)：色谱纯。 5.1.9 甲基叔丁基醚（C,H12O)：色谱纯 5.1.10 乙睛（CHN)：色谱纯 5.2试剂配制 5.2.130%氢氧化钾溶液：称取氢氧化（5.1.1)30g，加水溶解稀释至100ml。 5.2.20.1%BHT乙醇溶液：称取BHT(5.1.3)0.1g，以无水乙醇（5.1.4)100mL溶解，混匀。 5.2.3萃取溶剂：称取BHT（5.1.3)1g，以环已烷（5.1.5）200mL溶解，加入无水乙醚（5.1.6）400ml 和正已烷（5.1.7)400mL，混匀。 5.3标准品 5.3.1叶黄素（CAS号：127-40-2），纯度≥97.0%或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 1 NY/T3948—2021 5.3.2玉米黄质（CAS号：144-68-3），纯度≥95.0%或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 5.3.3β隐黄质（CAS号：472-70-8），纯度≥97.0%或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 5.4标准溶液配制 5.4.1标准储备液（40μg/mL)：分别称取叶黄素、玉米黄质、β隐黄质标准品1.00mg（精确至0.00001g） 于25mL棕色容量瓶中，用0.1%BHT乙醇溶液（5.2.2)溶解并定容至刻度。标准储备液充氮避光置于 18℃或以下的冰箱中，有效期3个月。 注：叶黄素、玉米黄质、β-隐黄质标准储备液使用前需校正，具体操作见附录A。 5.4.2标准工作液：分别移取标准储备液（5.4.1)0.05mL、0.10mL、0.20mL、0.50mL、1.00mL、 2.00mL到10mL棕色容量瓶中，用0.1%BHT乙醇溶液（5.2.2）定容至刻度，得到浓度为0.20μg/mL、 0.40μg/mL、0.80uμg/mL、2.00μg/mL、4.00μg/mL8.00μg/mL的系列标准工作液，标准工作液现用 现配。 5.5材料 5.5.1 pH试纸(pH1~14)。 5.5.2有机系过滤头（孔径为0.45μm）。 6仪器与设备 6.1天平：感量0.1mg和0.01mg。 6.2紫外可见分光光度计。 6.3 液相色谱仪，带二极管阵列检测器或紫外检测器。 6.4匀浆机。 6.5高速粉碎机。 6.6组织捣碎机。 6.7涡旋振荡器。 6.8恒温水浴振荡器。 6.9氮吹仪。 7分析步骤 7. 1 实验要求 由于叶黄素、玉米黄质、β-隐黄质对光敏感，除非另行说明，所有试验操作应在无500nm以下紫外光 的黄色光源或红色光源或避光环境中进行。 7.2试样制备 试样取可食部分经匀浆机匀浆或高速粉碎机粉碎或组织捣碎机粉碎均匀后，储存于样品瓶中，样品现 用现制备。 7.3试样处理 7.3.1碱水解 称取深黄色或深绿色干样品0.1g~0.5g，深黄色或深绿色湿样品0.5g~2.0g，浅黄色或浅绿色干 样品0.5g~2.0g，浅黄色或浅绿色湿样品2.0g~5.0g，其他样品5.0g~10.0g（样品精确至0.0001g）于 250mL三角瓶中，加人0.1%BHT乙醇溶液（5.2.2）30mL和30%氢氧化钾水溶液（5.2.1)10mL，混 勺。于50℃恒温水浴摇床150r/min避光皂化10min，取出后冷却至室温。 7.3.2提取 将皂化液用水50ml转人250mL分液漏斗中，加入苯取溶剂（5.2.3）50mL，振荡萃取3min，将下 层溶液转移至另一250mL分液漏斗中，加人萃取溶剂（5.2.3）50mL重复萃取2次，合并上层苯取液，每 次用水100mL洗涤苯取溶剂层，重复洗涤3次，直至将苯取溶剂层洗至中性，去除下层水相。 2