ICS 65.020.01 CCS B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3949—2021 植物源性食品中酚酸类化合物的测定 高效液相色谱一串联质谱法 Determination of phenolic acids in foods of plant origin by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry 行业标准信息服务平台 2021-11-09发布 2022-05-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 3949—2021 全国农业全品标准 前共服言 公兴店 食典通 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 可第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部农产品质量安全监管司提出。 本文件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口。 本文件起草单位：农业农村部食物与营养发展研究所、北京市营养源研究所、中国标准化研究院、内蒙 古蒙牛乳业集团有限公司、中国合格评定认可委员会、北京市理化分析测试中心、国家蔬菜工程技术研究 中心、中检集团中原农食产品检测（河南）有限公司。 本文件主要起草人：朱大洲、崔亚娟、徐佳佳、孔凡华、白沙沙、孙君茂、史波林、黄家章、刘鹏、梁克红、 赵欣、杨春雪、罗欣、李东、马文丽、杨志刚、宋晓东、李宏、马杰、贾丽、刘光敏、赵雪梅、宗珊盈。 行业标准信息服务平台 NY/T3949—2021 植物源性食品中酚酸类化合物的测定 高效液相色谱-串联质谱法 1范围 本文件规定了植物源性食品中酚酸类化合物的高效液相色谱-串联质谱测定方法。 本文件适用于果蔬及其制品、谷物、茶叶、药食 物源性食品中阿魏酸、对羟基苯甲酸、对-香豆 酸、丁香酸、龙胆酸、芥子酸、咖啡酸、没食子酸、水杨酸、香草酸、异阿魏酸、原儿茶酸、2-羟基肉桂酸、23 2规范性引用文件 RD 用面构成 文件必不 中，注日期的引用文件，仅 用体真最新版 的修 该日期对应的版本适用于本 文件Y 时括所不 单）适用于本文件。 GB/T 6682 析实 检贝水 规格租 验方法 3术语和定义 本文件没有需要 语和定义 RA 4原理 试样经碱性水解液提取 物，采用高效液相色 谱法测定，外标 水解为游 法定量。 5试剂与材料 5.1试剂 5.1.1 水:GB/T 规定 6 5.1.2 氢氧化钠(N 5.1.3 盐酸（HCI)：优 5.1. 4 乙酸乙酯（CHC 5. 1.5 乙睛（CH:CN)：色谱 5. 1. 6 甲醇（CH:OH)：色谱纯 5. 1.7 抗坏血酸（CHgO）：优级纯。 5.1.8乙二胺四乙酸（C.HN2O）：优级纯。 5.2试剂配制 5.2.1氢氧化钠溶液（3mol/L，含1%抗坏血酸和0.3%乙二胺四乙酸）：称取120g氢氧化钠（5.1.2） 10g抗坏血酸（5.1.7）、3.0g乙二胺四乙酸（5.1.8），加人700mL水中，待溶解后转移至1000mL容量瓶 中，用水定容至刻度。 5.2.2盐酸溶液（6mol/L）：量取50mL盐酸（5.1.3），缓慢注人50mL蒸馏水中，混匀。 5.2.370%甲醇水溶液：取70mL甲醇（5.1.6）和30mL水，混勺。 5.3标准品 16种酚酸类化合物标准品：纯度≥98.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。相关信 息见附录A。 1 NY/T3949—2021 5.4标准溶液的配制 5.4.1标准储备溶液（1mg/mL）：分别准确称取16种酚酸标准品各10mg（精确至0.01mg）,用甲醇 （5.1.6)溶解于10mL容量瓶，并定容至刻度，于一18℃下储存于密闭棕色玻璃瓶中，有效期为6个月。 5.4.2标准中间溶液：分别吸取0.2mL标准储备溶液于25mL棕色容量瓶中，用70%甲醇水溶液 （5.2.3）定容至25mL，制成标准中间溶液，现用现配。 5.4.3标准工作溶液：吸取适量标准中间溶液，用70%甲醇水溶液（5.2.3)配制成质量浓度为0.01ug/mL、 0.05μg/ml、0.1μg/mL、0.25μg/ml、0.5μg/mL、1μg/mL的标准曲线工作溶液，现用现配。 5.5材料 有机相微孔滤膜：孔径为0.22um。 6仪器设备 6.1高效液相色谱-串联质谱仪：带电喷雾离子源（ESI）。 6.2天平：感量0.01mg0.1mg。 6.3勾浆机。 6.4高速粉碎机。 6.5离心机：转速≥8000r/min。 6.6旋转蒸发仪：带有温度控制。 6.7涡旋振荡器。 6.8涡旋混合器。 7试样制备 试样取可食部进行制备。果汁、酒类等均匀的液体试样直接混匀：带悬浮物的液体试样、新鲜果蔬、半 固体等试样经匀浆机匀浆；固体试样采用高速粉碎机粉碎。试样制备后储存于样品瓶中备用，所有制备试 样于一18℃条件下保存。 8分析步骤 8.1提取 称取试样1g~5g（精确至0.0001g）于50mL离心管中，加入30mL3mol/L氢氧化钠溶液 （5.2.1），用涡旋振荡器混匀.振荡提取60min，用6mol/L盐酸溶液（5.2.2)调节pH至1.5~2.0.经离 心机8000r/min离心10min，上清液移入分液漏斗，分别用70mL乙酸乙酯（5.1.4）萃取2次，合并乙酸 乙酯萃取液，于35℃～40℃下旋转蒸发至干加入5mL70%甲醇水溶液（5.2.3），溶解蒸干后的物质，过 滤膜（5.5），待测。 8.2测定 8.2.1 仪器参考条件 a) 色谱柱：HSST3色谱柱，柱长100mm，内径2.1mm，颗粒度1.7μm，或性能相当者； b) 流动相：A为乙睛（5.1.5），B为水溶液（5.1.1)； 进样量：10μL； d) 柱温：30℃； e) 梯度洗脱程序，见表1； 表1流动相洗脱梯度程序 时间，min 流速，mL/min A,% B. % 0 0.3 10 90 2