ICS 65.020.01 CCS B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3950—2021 植物源性食品中10种黄酮类化合物的 测定 高效液相色谱一串联质谱法 Determination of 10 flavonoids in foods of plant origin by high perfermance liquidchromatography-tandemmassspectrometry 行业标准信息服务平台 2021-11-09发布 2022-05-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3950—2021 公共服育 食典通 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部农产品质量安全监管司提出。 本文件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口。 本文件起草单位：北京市营养源研究所、农业农村部食物与营养发展研究所、中国标准化研究院、内蒙 古蒙牛乳业（集团）股份有限公司、中国合格评定国家认可委员会、国家食品行业生产力促进中心、北京市 理化分析测试中心、国家蔬菜工程技术研究中心、中检集团中原农食产品检测（河南）有限公司。 本文件主要起草人：崔亚娟、朱大洲、白沙沙、孔凡华、许洪高、史波林、梁克红、陈雪、杨春雪、刘玉峰、 罗欣、李东、宋晓东、杨志刚、马文丽、李宏、马杰、贾丽、刘光敏、宗珊盈。 行业标准信息服务平台 I NY/T3950—2021 植物源性食品中10种黄酮类化合物的测定 高效液相色谱-串联质谱法 1范围 本文件适用于植物源性食品中表儿茶素、橙皮 元、皮素、黄豆黄素、木棍草素、芹菜素、杨 梅素、异鼠李素和柚皮素10种黄酮类化合物含量的测定 2规范性引用文件 PUBL 其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于 所有的修改单）适用于本 G 文件。 GB/T6682 格和租 3术语和定义 本文件没有需要界 RA 4原理 试样经乙醇溶液 提取得 离黄酮类化合 盐酸浴液提取得到游店 告合 黄酮类化合 物，采用高效液相色 普事联 谱仪测定：外标法 L 5试剂和材料 5.1试剂 5. 1. 1 水为 GB/T 5. 1. 2 乙醇（CHCH 5. 1.3乙醇(CH:CH2 5.1.4盐酸（HCI)：优级 5.1.5 乙(CH,CN):色谱 5.2试剂配制 5.2.175%乙醇溶液：取乙醇75mL （5.1.2）加水定容至1001 5. 2. 2 5.2. 3 乙醇盐酸溶液：取乙醇750mL（5.1.3），加人盐酸100mL（5.1.4），加水定容至1L，混匀。 5.3标准品 10种黄酮类化合物标准品：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 5.4标准溶液配制 5.4.1黄酮类化合物标准储备液：分别称取标准品各5mg（精确至0.01mg），用75%乙醇溶液（5.2.1） 溶解并定容至10mL即为500μg/mL的单标储备液，于一18℃储存于密闭棕色玻璃瓶中。 5.4.2黄酮类化合物混合标准溶液：分别量取一定量的各黄酮类化合物标准储备液，用75%乙醇溶液 (5.2.1)稀释成0.0100μg/mL、0.0200μg/mL、0.0500μg/ml、0.100μg/mL、0.200μg/mL、 0.500μg/mL、0.800ug/mL、1.000μg/mL的混合标准溶液或根据需要配制其他浓度，现用现配。 1 NY/T3950—2021 5.5材料 有机相滤膜：0.22μm。 6仪器与设备 6.1高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 6.2天平：感量0.01mg、0.1mg。 6.3高速粉碎机。 6.4匀浆机。 6.5恒温水浴锅：带回流装置。 6.6离心机：转速6000r/min。 7试样制备 试样取可食部进行制备。果汁、酒类等均匀的液体试样直接混匀；带悬浮物的液体试样、新鲜果蔬、半 固体等试样采用匀浆机匀浆：固体试样采用高速粉碎机粉碎。试样制备后储存于样品瓶中备用，所有制备 试样于一18℃条件下保存。 8分析步骤 8.1游离黄酮类化合物的提取 称取试样0.5g~5g（精确至0.0001g）于100mL具塞三角瓶中，加人乙醇溶液（5.2.2)80mL，于 6000r/min离心10min，上清液过0.22μm滤膜备用。 8.2游离与糖苷结合黄酮类化合物的提取 称取试样0.5g~5g（精确至0.0001g）于100mL具塞三角瓶中，加人乙醇-盐酸溶液（5.2.3） 80mL，于90℃回流提取90min，冷却后转移至100mL容量瓶中，乙醇盐酸溶液（5.2.3）定容至刻度，混 匀后，6000r/min离心10min，上清液过0.22μum滤膜备用。 8.3测定 8.3.1仪器参考条件 a) 色谱柱：HSST3色谱柱（柱长100mm，内径2.1mm，颗粒度1.7μm）或性能相当者； b) 流动相：A为水（5.1.1），B为乙晴（5.1.5）.流速为0.3mL/min； c) 进样量：10μL； d) 柱温：30℃； e) 梯度洗脱条件，见表1。 表1流动相梯度洗脱程序 时间，min 流速，mlL/min A.% B,% 0 0.3 90 10 0.5 0. 3 70 30 1. 0 0.3 60 40 4. 0 0. 3 40 60 4. 1 0.3 90 10 5.0 0.3 90 10 扫描方式：离子源为电喷雾电离源负离子扫描方式（ESI）； g） 去溶剂气和锥孔反吹气流速分别为800L/h和150L/h，气体均为高纯氮气； h) 碰撞气流速为0.15mL/min，气体为氟气； i 去溶剂辅助加热温度为400℃； 2