ICS 67.060 CCS B 22 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3941—2021 粮食中植酸含量的测定 高效液相色谱法 Determination of phytic acid content in grain- High performance liquid chromatography 业标准信息服务平台 2022-05-01实施 2021-11-09发布 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T 3941—2021 全国农业品材 言 食典通 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件起草单位：农业农村部稻米及制品质量监督检验测试中心、中国水稻研究所、中国计量大学。 本文件主要起草人：扈战强、胡贤巧、方长云、朱敏、邵雅芳、卢林、于永红、朱智伟。 行业标准信息服务平台 NY/T 3941—2021 粮食中植酸含量的测定 高效液相色谱法 1范围 本文件规定了粮食中植酸含量的液相色谱测定方法的要求 本文件适用于稻米、小麦、玉米、高梁、小米、绿豆、马铃薯、番薯中的植酸含量的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本 文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 最新版本（包活所有的修改单）适用于本 仅该日期对应的版本适用于 文件。 RD 分析实验室 用水规格和试 GB/T6682 3术语和定义 本文件没有需要 利 S 4原理 夜提取 试样用盐酸溶 高效液相 定： 小标法定量。 液 R 试剂和材料 5. 1 通用要求 小听用试利印 及 5.2 盐酸(HCI 及缝 5.3磷酸二氢钠 FCAS号0 色谱 5.4甲醇(CH 5.50.5mol/L 2），加水稀释 5.625mmol/L碳 999磷 水 至1000ml。 5.72.5mmol/L磷酸 钠 加水杯 1000ml 5.8流动相（25mmol） 5.3），溶于900mL水 磷酸二 醇准研 中，加人50mL甲醇（5.4）加水稀释至 超声脱气 min，备用。 5.9标准品：植酸钠（sodium 号：14306 80.纯度≥99%。 5.10标准溶液配制 0.1mg）植酸钠标准品（5.9），用25mmol/L磷酸二氢钠溶 5.10.1标准储备液：准确称取1.4g（精确至 液（5.6）溶解并定容至100mL，配成浓度为10mg/mL的标准储备溶液，于4℃下保存，有效期6个月。 5.10.2标准工作溶液：吸取适量的植酸标准储备液（5.10.1)，用25mmol/L磷酸二氢钠溶液（5.6）配制成 浓度为0.05mg/mL.0.10mg/mL.0.25mg/ml.0.50mg/mL、1.00mg/ml2.00mg/mL和4.00mg/mlL 的标准工作溶液。 5.11固相萃取小柱：强阴离子交换柱（100mg/1mL）。使用前，依次用5mL磷酸二氢钠溶液（5.6）和 5mL纯水活化，保持柱体湿润。 6仪器和设备 6.1液相色谱仪：配紫外检测器（或二极管阵列检测器）。 1 NY/T3941—2021 6.2天平：感量为0.1mg、1mg和0.01g。 6.3离心机：转速≥10000r/min。 6.4超声波清洗器。 6.5谷物粉碎机。 6.6组织研磨仪。 6.7旋转蒸发仪。 6.8微孔滤膜：0.22μm，水相。 7试样制备 7.1谷物及豆类样品 将混匀的谷物及豆类样品500g，用谷物粉碎机（6.5）粉碎均匀后过孔径0.25mm的圆孔筛，混匀，装 人洁净的盛样袋内，备用。 7.2薯类样品 取代表性样品500g，用干净纱布轻轻擦去样品表面的附着物或清洗干净并用滤纸吸干水分，切碎，用 四分法取样或直接放入勾浆机中成匀浆，混匀，放人聚乙烯瓶中一20℃～一16℃条件下保存，备用。 8分析步骤 8.1提取 8.1.1谷物及豆类样品 80kHz)提取2h，取出，于5000r/min下离心15min，准确吸取10mL上清液于50mL蒸馏瓶中，于 （50士2)℃旋转蒸发蒸干，用10mL水溶解待净化。 8.1.2薯类样品 称取5g薯类试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加人20mL盐酸溶液（5.5），室温下超声（功 率：80kHz）提取2h，取出，于5000r/min下离心15min，准确吸取10mL上清液于50ml蒸馏瓶中，于 （50士2）℃旋转蒸发蒸干，用10mL水溶解待净化 8.2净化 准确吸取5mL提取液通过预先活化的固相萃取小柱（5.11），依次用5mL磷酸二氢钠溶液（5.7）和 5mlL水洗涤，弃去所有流出液。用5mL磷酸二氢钠溶液（5.6）洗脱，收集洗脱液，用磷酸二氢钠溶液 (5.6)定容至10mL，过0.22μm滤膜待测。 8.3液相色谱参考条件 8.3.1色谱柱：反相Cls色谱柱（5μm，250mmX4.6mm），或性能相当者； 服务平台 8.3.3流速：0.5mL/min； 8.3.4柱温：30℃； 8.3.5检测波长：254nm； 8.3.6进样量：10μL。 8.4标准曲线 取标准工作溶液（5.10.2），按浓度由低到高依次进样测定，以植酸色谱峰面积和浓度作图，得到标准 曲线，其中植酸标准物质的色谱图见附录A。 8.5测定 取净化后的植酸提取溶液进样测定，从标准曲线得到样液中植酸浓度。试样溶液中植酸的响应值应 均在标准曲线线性范围内；超过线性范围，应用25mmol/L磷酸二氢钠溶液（5.6)稀释后重新测定。同时 2