ICS 67.120.10 NY CCSX22 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3904—2021 肉及肉制品中杂环胺检测 液相色谱一串联质谱法 Determination of heterocyclic amines in meat and meat products by liquid chromatography-tandem mass spectrometry method 行业标准信息服务平台 2021-05-07发布 2021-11-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3904—2021 公共服务平龄 典通 本文件按照GB/T1.1一2020标准化工作导则 起草。 本文件由农业农村部乡村产业发展司提出。 本文件由农业农村部农产品加工标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：中国农业科学院农产品加工研究所、河南双汇投资发展股份有限公司、唐人神集团 股份有限公司、新希望六和股份有限公司、东北农业大学、中粮集团营养健康研究院、湖北安井食品有限 公司。 本文件主要起草人：张德权、惠腾、王振宇、孔保华、孟少华、刘欢、丁晓倩、单吉浩、张晓琳、潘腾、刘志 斌、胡忠良。 行业标准信息服务平台 1 NY/T3904—2021 肉及肉制品中杂环胺检测 液相色谱-串联质谱法 1范围 本文件规定了附录A给定的肉及肉制品中13种杂环胺的液相色谱-串联质谱测定方法。 本文件适用于附录A给定的肉及肉制品中13种杂环胺的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅 该日期对应的版本适用于本文件，不注日期的引用文件 最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T6682 3原理 小散固相 标法定量。 试样采用乙睛提取 极 4试剂和材料 所有剂 为分析纯水为符合 除另有规定外 完定的 4.1试剂 L 4.1.1乙酸( COH 色谱纯 H CN色 4.1.2乙晴（ 谱纯 H.COONH 4.1.3乙酸铵（ OH 4.1.4甲醇（ 4.1.5硫酸镁 4.1.6无水醋酸镜 4.2材料 4.2.1陶瓷均质 4.2.2N丙基乙 4.2.3封尾Cs固相本 真料：米 4.2.4有机相型微孔滤膜：0.22μm。 4.3试剂配制 4.3.11%乙酸-乙溶液：量取1.0ml乙酸（4.1.1至100ml容量瓶中，用乙睛（4.1.2)稀释并定容至 刻度，摇匀。 4.3.2乙酸乙酸铵缓冲液：准确称取0.7708g乙酸铵（4.1.3）.溶于100mL水中，用乙酸（4.1.1)调 pH至2.90，转人1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。 4.4标准品 杂环胺标准品：应满足附录A的要求， 4.5标准溶液配制 4.5.1杂环胺标准储备液：分别称取10.0mgGlu-P-2、IQx,MeIQ、Glu-P-1、8-MeIQx、Norharman、4,8 DiMelQx、7,8DiMeIQx,Harman、4,7,8-TriMelQx、PhIP、AαC、Trp-P-1(4.4)于100mL容量瓶中，用甲 醇（4.1.4）配制成浓度为100μg/ml的储备液；吸取10.0mL储备液到100mL容量瓶中，用甲醇 （4.1.4)稀释为10.0ug/mL的标准储备液，一18℃避光保存，有效期1个月。 NY/T3904—2021 4.5.2混合标准工作液：分别吸取0.01mL、0.02mL、0.05mlL、0.10ml、0.20mL、0.50mL杂环胺标 准储备液（4.5.1)于100mL容量瓶中，用甲醇（4.1.4)稀释，得到杂环胺浓度分别为1.0μug/L2.0μug/L、 5.0ug/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0ug/L的混合标准溶液，现用现配。 5仪器设备 5.1液相色谱串联四极杆质谱：配有电喷雾离子源。 5.2电子天平：感量0.0001g和0.01g。 5.3离心机：转速≥10000r/min。 5.4pH计：感量0.01。 5.5氮气浓缩仪。 5.6涡旋振荡器。 5.7均质器。 5.8色谱柱:Zorbax SBCis(2.1 mmX 50mm,1.8μm)。 注：非商业声明，此处列出的色谱柱仅供参考，不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家的色谱柱。 6分析步骤 6.1试样制备 取试样肉及肉制品中可食部分，捣碎混匀，标识后一18℃冷冻保存。 6.2试样处理 6.2.1提取 称取捣碎试样2g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加人1块陶瓷均质子（4.2.1)和10mL水，振 荡20min；加人10mL1%乙酸-乙腈溶液（4.3.1)，振荡15min；加人4.0g硫酸镁（4.1.5）和1.0g无水 醋酸钠（4.1.6），涡旋混合1min。试样提取液在4℃、10000r/min条件下离心10min，分为上、中、下3 层，上层为含杂环胺的有机溶液，中层为肉泥，下层为水和陶瓷均质子，取上层有机溶液6mL供净化 使用。 6.2.2净化 向离心后的6mL待净化有机溶液中加入0.9g硫酸镁（4.1.5）、0.3gN-丙基乙二胺（PSA)（4.2.2) 和封尾0.3gCg固相萃取填料（4.2.3），在1000r/min条件下均质1min，然后在4℃、10000r/min的 条件下离心5min；离心后取1.0mL上清液在30℃条件下氮气浓缩至近干，加入0.50mL甲醇（4.1.4） 溶液复溶得试样溶液，涡旋混匀，将试样溶液经微孔滤膜（4.2.4)过滤至进样瓶，待上机测定。 6.3测定条件 6.3.1液相色谱参考条件 a) 色谱柱:ZorbaxSB-Ci(2.1mmX50mm，1.8μm）: b) 流动相：A为乙酸-乙酸铵缓冲液（4.3.2），B为乙腈（4.7.2）梯度洗脱程序参见表1； c) 流速：0.4mL/min; d) 柱温：30℃； e) 进样量：2.0μL。 表1流动相梯度洗脱程序 时间 流动相A 流动相B min % % 0.0 95.0 5.0 0.5 95.0 5.0 5.0 85.0 15.0 2