ICS 65.020.01 CCS B 21 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 4021—2021 小麦品种真实性鉴定 SNP标记法 Wheat(Triticum aestivum L.)variety genuineness identification- 行业标准信息服务平台 SNPbasedmethod 2021-12-15发布 2022-06-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 4021—2021 前平言 全国农业食品标准 公共服务 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部种业管理司提出。 本文件由全国农作物种子标准化技术委员会（SAC/TC37）归口。 本文件起草单位：北京市农林科学院北京杂交小麦工程技术研究中心、全国农业技术推广服务中心、 北京作物学会、山东省农业科学院作物研究所、中国农业科学院作物科学研究所、黑龙江省农业科学院农 产品质量安全研究所。 本文件主要起草人：庞斌双、任雪贞、刘丽华、赵昌平、张明明、金石桥、李宏博、刘阳娜、周泽宇、张风 廷、张立平、张胜全、马锦绣、权威、王穆穆、张旭、侯建、关海涛、傅友兰、王卫红。 行业标准信息服务平台 1 NY/T 4021—2021 小麦品种真实性鉴定 SNP标记法 1 范围 本文件规定了利用SNP标记法进行小麦（TriticumaestivumL.）品种真实性鉴定的术语和定义、缩 略语、原理和总则、试验条件、试剂和材料、仪器设备、样品、检测程序、结果计算与表示和结果报告。 也适用于品种关系鉴定。 本文件适用于小麦品种的真实性验证，真实身份鉴定· 2规范性引用文件 其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于 包括所有的修改单）适用于 本文件。 GB/T 3543.2 GB/T 6682 格租 术语和定义 S 适用于 下列术语和定义连 3. 1 A Sngle 单核苷酸多 态性 nucleotidepolymorphism 单个核甘酸变异所引起的DNA序列多态性 在基因组水 3.2 -vaiety verifieation 品种真实性验证 与其对应品种名 称的标准样品比较检测证实送验样品 重用于标准样品的 标 进比 情况下，可用对照样 3. 3 品种真实性身份墅 identification 通过与标准样品D 指纹装 给样品的 3.4 标准样品 standard sampl NA样品。 国家指定机构保存的具有法定 物种子 4缩略语 下列缩略语适用于本文件。 CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrimethylammoniumbromide）。 DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）。 KASP：竞争性等位基因特异性PCR（kompetitiveallelespecificPCR）。 PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction）。 SDS：十二烷基硫酸钠（sodiumdodecylsulfate）。 5原理和总则 5.1原理 小麦不同品种的基因组，存在着能够世代稳定遗传的单核苷酸多态性（SNP差异。利用SNP差异， 1 NY/T4021—2021 通过与标准样品DNA指纹数据比对或筛查的方式，进行品种真实性验证和品种真实性身份鉴定。 5.2总则 5.2.1应依据“适于检测目的”的原则，统筹考虑检测规模和检测能力，择定适宜的检测平台、引物或探 针、样品数量，经过验证，制订相应的检测方案；品种真实性验证依据SNP位点差异数日进行判定，品种真 实性身份鉴定依据SNP位点相似度进行判定。品种关系鉴定可采用品种真实性身份鉴定的检测方案。 5.2.2本文件避选了96个SNP位点用于品种真实性验证，引物信息、等位变异、参照样品信息及位点信 息详见附录A。50000个SNP位点用于品种真实性身份鉴定，位点信息详见种业大数据平台。品种真实 性验证允许采用序贯方式检测，若检测到可排除两者为同一品种的差异位点数的，可终止检测。 5.2.3本文件推荐了基于KASP技术的荧光原位扫描平台和基于激光微刻SNP芯片分型2个检测 平台。 6试验条件 真实性鉴定应在有利于检测正确实施的控制条件下进行，包括但不限于下列条件： 种子检验人员具备熟悉所使用检测技术的知识和技能； 所有仪器与使用的技术相适应，并已经过定期维护、验证和校准； 使用适当等级的试剂和灭菌处理的耗材； 一使用校准检测结果评定的适宜参照样品。 7试剂和材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的一级水。 7.1DNA提取 7.1.1 CTAB[Cl6H3(CH,);NBr,CAS号:57-09-0]。 7. 1. 2 三氯甲烷（CHCl:，CAS号：67-66-3）。 7.1.3异戊醇CsH12O,CAS号：123-51-3)。 7.1.4异丙醇(C,H.O,CAS号：67-63-0)。 7.1.5乙二胺四乙酸二钠（CloHNNa2Og，CAS号：139-33-3）。 7.1.6 三羟甲基氨基甲烷ENH2C(CHzOH)，CAS号：77-86-1]。 7.1.7氢氧化钠(NaOH.CAS号：1310-73-2)。 7.1.8氯化钠(NaCI,CAS号7647-14-5)。 7.1.9无水乙醇(CH,CH2OH,CAS号：64-17-5)。 信息服务平台 7. 1. 10 盐酸（HCI,CAS号：7647-01-0)。 7. 1. 11 β巯基乙醇（CH.OS,CAS号：60-24-2）。 7. 1. 12 醋酸钠（C,HNaO2CAS号：127-09-3）。 7. 1. 13 醋酸钾（CHKO2CAS号：127-08-2）。 7.1.14 SDS(C2H2sNaSO,CAS号:151-21-3)。 7. 1. 15 RNaseA(CAS号:9001-99-4)。 7.2SNP基因分型 7.2.12XPCR MIX。 7.2.2引物混合液。 7.2.3定制芯片及配套试剂。 8仪器设备 8.1高速冷冻离心机：转速≥12000r/min。 2