ICS 65.020.01 NY CCS B 21 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 4022—2021 玉米品种真实性鉴定 SNP标记法 Maize (Zea mays L.) variety genuineness identification- 行业标准信息服务平台 SNPbasedmethod 2021-12-15发布 2022-06-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 4022—2021 公共服务 食典通 起草。 本文件的某些内容有可能涉及专利。本文件的发布机构不应承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部种业管理司提出，由全国农作物种子标准化技术委员会（SAC/TC37）归口。 本文件起草单位：北京市农林科学院玉米研究中心、全国农业技术推广服务中心、北京作物学会。 本文件主要起草人：王凤格、晋芳、田红丽、易红梅、赵久然、金石桥、杨扬、王蕊、葛建、支巨振、赵 建宗。 行业标准信息服务平台 NY/T4022—2021 玉米品种真实性鉴定 SNP标记法 1范围 本文件规定了利用SNP标记法进行玉米（ZeamaysL.）品种真实性鉴定的术语和定义、原理和总 则、试验条件、试剂和材料、仪器设备、样品、检测程序、结果计算与表示和结果报告。 本文件适用于玉米自交系和单交种的品种真实性验证、真实性身份鉴定，也适用于品种关系鉴定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构感B件必不可少的条款 其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文 ING 本文件。 AH GB/T3543.2 农作物种 分析实 室用水 规格租 验方法 GB/T6682 3 术语和定义 S 下列术语和定 适用于本 3. 1 单核苷酸多 态性 nueleotidepolymorphisn(SNI 单上衫 所起的NA序列多态 在基因组水 中 3. 2 varie 品种真实性验证 Tication 不适 与其对应品种 称的标 检测证实送验样品 产标准样品的 情况下，可用对照 进行上 3.3 品种真实性身份紧定 identini ication 通过与标准样品 3. 4 标准样品 standard Sampl 国家指定机构保存的具有 身份的 种子或 人样品。 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 CTAB：|六烷基三甲基溴化铵（cetyltrimethylammoniumbromide）。 DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）。 KASP：竞争性等位基因特异性PCR（kompetitiveallelespecificPCR）。 PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction）。 SDS：十二烷基硫酸钠（sodiumdodecylsullate)。 5原理和总则 5.1原理 玉米不同品种的基因组存在着能够世代稳定遗传的单核酸多态性（SNP）差异，利用SNP差异，通 1 NY/T4022—2021 过与标准样品DNA指纹数据比对或筛查的方式，进行品种真实性验证和品种真实性身份鉴定。 5.2总则 5.2.1应依据“适于检测日的”的原则，统筹考虑检测规模和检测能力，择定适宜的检测平台、引物或探 针、样品数量，经过验证，制订相应的检测方案；品种真实性验证依据SNP位点差异数日进行判定，品种真 实性身份鉴定依据SNP位点相似度进行判定。品种关系鉴定可采用品种真实性身份鉴定的检测方案。 5.2.2本文件避选了96个SNP位点用于品种真实性验证，引物信息、等位变异、参照样品信息及位点信 息详见附录A。61214个SNP位点用于品种真实性身份鉴定，位点信息详见种业大数据平台。品种真实 性验证允许采用序贯方式检测，若检测到可排除两者为同一品种的差异位点数的，可终止检测。 平台。 6试验条件 真实性鉴定应在有利于检测正确实施的控制条件下进行，包括但不限于下列条件： 种子检验人员具备熟悉所使用检测技术的知识和技能； 所有仪器与使用的技术相适应，并已经过定期维护、验证和校准； 使用适当等级的试剂和灭菌处理的耗材； 使用校准检测结果评定的适宜参照样品。 7试剂和材料 7.1DNA提取 7.1.1 CTAB[C/6H3(CH:);NBr,CAS 号:57-09-0]。 7. 1. 2 三氯甲烷（CHCI3，CAS号：67-66-3）。 7.1.3异戊醇(CH2O,CAS号：123-51-3)。 7.1.4异丙醇(C,H.O.CAS号：67-63-0)。 7.1.5乙二胺四乙酸二钠（CloHuNzNazO，CAS号：139-33-3)。 7. 1. 6 三羟甲基氨基甲烷（NH2C（CH,OH）CAS号：77-86-1）。 7. 1.7 氢氧化钠（NaOHCAS号：1310-73-2）。 7. 1. 8 氯化钠（NaCI,CAS号：7647-14-5)。 7. 1. 10 盐酸（HCI.CAS号：7647-01-0)。 7. 1. 11 β-巯基乙醇（CH.OS，CAS号：60-24-2） 7. 1. 12 SDS(C/2H2sNaSO，CAS号：151-21-3)。 7.2SNP基因分型 7.2.1 2XPCR MIX。 7.2.2引物工作液。 7.2.3定制芯片及配套试剂。 8仪器设备 8.1高速冷冻离心机：转速≥12000r/min。 8.2微量移液工作站或微量移液器。 8.3水浴锅或干式恒温金属浴：20℃~100℃ 2