ICS 07.080 CCS A 21 中华人民共和国国家标准 GB/T 38490—2021 微生物高通量适应性进化测定 微流控芯片法 Determination of high-throughput adaptive evolution for microorganismsMicrofluidic chip method 2022-07-01实施 2021-12-31发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T38490—2021 前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任， 本文件由中国标准化研究院提出并归口。 本文件起草单位：清华大学、洛阳华清天木生物科技有限公司、中国标准化研究院， 本文件主要起草人：张独、邢新会、剪兴金、李梅、王立言、郭肖杰、张乐乐、马爱进。 1 GB/T38490—2021 微生物高通量适应性进化测定 微流控芯片法 1范围 本文件规定了用微流控芯片法测定微生物高通量适应性进化的方法。 本文件适用于利用微流控芯片法对不产生表面活性剂的单细胞形态可培养微生物的高通量适应性 进化的测定。 2规范性引用文件 2 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于 本文件。 GB/T 6682 2分析实验室用水规格和试验方法 3 3术语和定义 SAG 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 适应性进化 adaptiveevolution 在实验室条件下通过对微生物在某一特定环境下进行连续传代培养，来模拟微生物对环境的长期 适应过程。 3.2 适合度fitness 生物体或生物群体对环境适应的量化特征，是评估生物所具有的各种特征的适应性，以及在进化过 程中继续往后代传递能力的指标 原理 4 在微生物培养芯片上生成培养基包裹菌体的微液滴，通过液滴在芯片主管道中的往复运动使微生 物在芯片上生长繁殖，通过液滴分割融合操作实现培养基的不断补充和更换，实现微生物连续传代，以 实现微生物对特定培养条件的适应性进化，获得生长速率提高或者对特定环境获得耐受性提高的菌株 5 试剂和材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂 5.1水 GB/T6682，一级水。 1 GB/T38490—2021 5.2培养基 根据不同菌株的需求配置相应的培养基，高温高压灭菌后置于4℃冰箱保存备用。 5.3油相 配制含10g/L司盘-80的矿物油作为液滴生成的油相，混合均匀，室温保存备用。 6仪器设备 6.1微生物微液滴培养仪。 6.2微生物培养芯片。 7适应性进化操作步骤 7.1菌体准备与培养 7.1.1菌体准备 现便于挑取的单菌落。 7.1.2菌体培养 在无菌条件下挑取固体培养基上单菌落放人相应的液体培养基中，置于恒温摇床在最适条件下培 养至对数生长中后期。 7.2 微生物培养芯片安装及初始化 操作如下： a) 吸取过滤后的矿物油冲洗微生物培养芯片内部2次～3次。将盛有60mL～80mL过滤后的 矿物油的油相进样瓶和冲洗后的微生物培养芯片置于紫外灯下照射超过1h后，安装至微生 物微液滴培养仪相应位置。 b）设定油水检测激光光压值，设定合适的培养温度，进行初始化操作。初始化时间应大于6h。 7.3样品准备 准备三个试剂进样瓶并编号A、B、C,清洗后在121℃下高温高压灭菌15min。准备新鲜培养基和 含一定浓度（根据实验要求而定）胁迫因子的培养基各8mL～10mL；准备用无菌培养基稀释50倍的 生长到对数生长中后期的菌液3mL~5mL。 用无菌针管先向三个试剂进样瓶侧管注人4mL～8mL油相。注射完毕旋转进样瓶，让油相浸湿 整个进样瓶内部，以同样方式向A瓶注入菌液约3mL～4mL，向B瓶和C瓶分别注人新鲜培养基和 含胁迫因子的培养基6mL～8mL，最后注人油相将进样瓶装满：再将试剂进样瓶对应安装进微生物微 液滴培养仪中。再次初始化排出试剂进样瓶中的空气，时间应不少于10min。 7.4传代条件设置和液滴生成 选择“适应性进化”功能，设定所需生成液滴的数量和菌体浓度检测波长。 设定传代方式。传代方式有两种：一是根据细菌光密度（opticaldensity，OD）设定，即菌株生长至