ICS 65.080 G 20 GD 中华人民共和国国家标准 GB/T32951—2016 有机肥料中土霉素、四环素、金霉素与强力 霉素的含量测定 高效液相色谱法 Determination of oxytetracyline, tetracyline, chlortetracycline and doxycycline content for organic fertilizersHPLC method 2016-08-29发布 2017-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T32951—2016 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国石油和化学工业联合会提出 本标准由全国肥料和土壤调理剂标准化技术委员会（SAC/TC105)归口。 本标准起草单位：上海化工研究院、上海出人境检验检疫局工业品与原材料检测技术中心、泰州市 产品质量监督检验所、上海交通大学。 本标准主要起草人：周辉、周韵、孙明星、商照聪、叶平、马明、闵红、沈国清、赵杰、洪丽玲， I GB/T32951—2016 有机肥料中土霉素、四环素、金霉素与强力 霉素的含量测定 高效液相色谱法 警告：使用本标准可能会涉及到危险的材料、操作和设备，但本标准无意对与其使用相关的所有安 全问题都提出建议。使用者在应用本标准之前，有责任建立使用的安全和防护措施，并确定相关规章限 制的使用性。 1范围 本标准规定了有机肥料中土霉素、四环素、金霉素和强力霉素含量的高效液相色谱检测方法。 本标准适用于有机肥料、有机-无机复混肥料中土霉素、四环素、金霉素和强力霉素含量的测定。 本标准不适用于豆饼肥中土霉素、四环素、金霉素和强力霉素含量的测定。 本方法检出限分别为：土霉素0.75mg/kg，四环素0.75mg/kg，金霉素1.0mg/kg，强力霉 素 0.75 mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义 GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 试样中土霉素、四环素、金霉素和强力霉素经Na,EDTA-Mcllvaine-甲醇提取液提取、固相萃取小柱 净化处理后进样，高效液相色谱紫外检测器测定，外标法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 乙睛：色谱纯。 4.3 磷酸氢二钠(NazHPO4·12HzO)。 4.4 柠檬酸（C,H.O，：H2O)。 4.5 乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA·2H,O)。 4.6 水合草酸(C,H,O·2HzO)。 4.7 磷酸氢二钠溶液：0.4mol/L。称取143.26g磷酸氢二钠，用水溶解，定容至1000mL。 4.8 柠檬酸溶液：0.2mol/L。称取42.03g柠檬酸，用水溶解，定容至1000mL。 1 GB/T32951—2016 4.9 乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA）溶液：0.1mol/L。称取37.22g乙二胺四乙酸二钠，用水溶解，定 容至1000mL。 4.10磷酸氢二钠-柠檬酸（Mcllvaine)缓冲液（pH=6.8土0.05）：将1000mL0.4mol/L磷酸氢二钠溶 液（见4.7）与294mL0.2mol/L柠檬酸溶液（见4.8）混合。 4.11NazEDTA-Mcllvaine-甲醇提取液：取NazEDTA（见4.9），磷酸氢二钠-柠檬酸（Mcllvaine）缓冲液 （见4.10）与甲醇按1十1十2（体积）比例混匀，必要时用NaOH溶液或HCI溶液调节pH=7.20士0.05。 4.12草酸溶液：0.01mol/L。称取1.26g草酸，用水溶解，定容至1000mL。 4.13甲醇-水（1+19）：量取5mL甲醇与95mL水混勺。 4.14草酸-甲醇溶液：0.01mol/L。称取0.13g草酸，用甲醇溶解，定容至100mL。 4.15土霉素（oxytetracycline，CAS：2058-46-0）、四环素（tetracyline，CAS：64-75-5）、金霉素（chlortet- racycline，CAS：64-72-2）、强力霉素（doxycycline，CAS：24390-14-5）标准物质：纯度92%~98%。 4.16土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准储备溶液：2mg/mL。准确称取一定量的土霉素、四环素、 金霉素、强力霉素标准物质（见4.15），分别用甲醇配成2mg/mL的标准储备液。储备液于0℃～8℃ 保存。 4.17土霉素、四环素、金霉素、强力霉素混合标准溶液：分别取5mL土霉素、四环素、金霉素、强力霉 素标准储备液（见4.16）至100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀，每种物质浓度为100μg/mL，储 存于冰箱中，每周配制。 使用前依次通过2mL甲醇及2mL水预处理，保持柱体湿润。 5仪器和设备 5.1 液相色谱仪：配紫外检测器 5.2 分析天平：感量0.1mg。 5.3 机械振荡提取仪：50次/min500次/min。 5.4 冷冻离心机：转速大于3500r/min。 5.5 固相萃取装置。 5.6 真空泵。 5.7 氮气吹干仪。 5.8 pH计：测量精度土0.02。 5.9 针式过滤头：0.22μm。 5.10 金属试验筛：0.5mm。 6试样制备与保存 6.1i 试样的制备 将样品粉粹，全部通过0.5mm试验筛，待用。 6.2试样保存 过筛的实验室样品在室温（约25℃）下避光保存，并注意防潮防霉。 2