ICS 65.020.01 B 16 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 33116—2016 琉球球壳蜗牛检疫鉴定方法 Detection and identification of Acusta despecta (Gray,1839) 2016-10-13发布 2017-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 33116—2016 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化委员会（SAC/TC271）提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局、中华人民共和国宁波出人境检验检疫 局、中华人民共和国浙江出人境检验检疫局、中国科学院动物研究所。 本标准主要起草人：周卫川、王沛、崔俊霞、吴志毅、肖琼、陈德牛。 I GB/T33116—2016 琉球球壳蜗牛检疫鉴定方法 1 范围 本标准规定了琉球球壳蜗牛Acustadespecta（Gray，1839）的检疫鉴定方法。 本标准适用于琉球球壳蜗牛的检疫鉴定。 规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 SN/T3067软体动物常规检疫规范 3术语和定义 SN/T3067界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 膜epiphragm 蜗牛分泌的一种与壳口同样大小和形状的乳白色不透明黏液膜，用以封闭壳口。 3.2 阴茎penis 蜗牛雄性生殖器官。 注：阴茎系统一般由阴茎、阴茎本体、阴茎牵引肌和鞭状体组成。 3.3 矢囊 dartsack 蜗牛雌性生殖系统中一个藏有1枚或多枚骨针的肌肉质的囊状结构。 3.4 恋矢 lovedart 矢囊中钙质或壳质的骨针，为蜗牛交配时刺激器官。 注：恋矢的质地和形状常用于分类。 3.5 受精囊 bursacopulatrix 蜗牛的受精器官，由受精囊和受精囊柄组成。 注：其中受精囊柄的形态和有无分支常用于分类鉴定。 4基本信息 学名：Acustadespecta（Gray，1839），其亚种有：A.despectadespecta（Gray，1839)；A.despecta praetenuis (Pilsbry & Hirase,1904);A.despecta sieboldiana (Pfeiffer,1850)。 异名:Helir despecta Gray,1839;A.despecta Sowerby,1839;Eulota sieboldiana Pfeiffer,1905; 1 GB/T331162016 Eulotakikaiensis Pilsbry,1902;A.despecta ikiensis (Pilsbry &Hirase,1904);A,despectakikaiensis (Pilsbry,1902). 英文名：Ryukyu round snail;Korean round snail。 分类地位：琉球球壳蜗牛A.despecta（Gray，1839），在分类上属于软体动物门Mollusca，腹足纲 Gastropoda，柄眼目Stylommatophora，巴蜗牛科Bradybaenidae，球壳蜗牛属AcustaAlbers，186o。琉 球球壳蜗牛的近似种有灰球壳蜗牛A.ravida（Benson，1842）、红粉缘球壳蜗牛A.tourannensis（Sou- leyet,1842). 5方法原理 琉球球壳蜗牛昼伏夜出，常隐藏在人们难以发现的地方，易于传播。其传播特点是不需要特定的寄 主，凡接触过地面的物品都可传播。传播方式和途径是确定现场检疫方式的依据。贝壳形态、软体解剖 和分子特征是实验室鉴定的主要依据。 6器具和试剂 6.1器具 体视显微镜、放大镜、手电筒、塑料自封袋、广口标本瓶、4mm孔径土壤筛、小铁铲、游标卡尺、白瓷 盘、培养皿、镊子、剪刀、显微镊子、显微剪刀、微针、解部蜡盘、标签、移液枪、微型离心机、PCR仪、 1.5mL离心管、0.2mLPCR反应管、恒温金属浴 6.2试剂 75%乙醇、无水乙醇、硫酸镁、动物基因组DNA提取试剂盒、PCR反应液、ddHzO。 7现场检测 SAG 对来自疫区（参见附录A）的运输工具和货物实施重点查验。仔细检查运输工具、废塑料、木质包装 箱、苗木、水果、蔬菜、花卉、未经加工的植物性材料等是否有蜗牛附着其上，琉球球壳蜗牛昼伏夜出，尤 其要注意阴暗蔽光处的检查，用手电筒仔细寻找蜗牛的行迹。琉球球壳蜗牛爬行过后，会留下银灰色的 丝带状黏液痕迹，这是判定是否有蜗牛污染的重要依据。发现蜗牛标本，随时装人塑料自封袋或标本 瓶，带回实验室做进一步的检验鉴定。发现盆景等携带土壤或其他细碎衬垫材料时，需过筛检查是否有 卵或幼螺。 8实验室鉴定 8.1测量观察和软体解剖 用游标卡尺测量蜗牛贝壳的壳高和壳宽、卵粒直径。用肉眼或放大镜或体视显微镜仔细观察卵和 螺的形态特征。 将闷杀（见10.1)处理后的标本，参照SN/T3067解剖软体，分离出生殖系统。 2