ICS 65.100 B 17 中华人民共和国国家标准 GB/T 15670.21—2017 农药登记毒理学试验方法 第21部分：体内哺乳动物肝细胞 程序外DNA合成（UDS）试验 Toxicological test methods for pesticides registration- Part 21: Unscheduled DNA synthesis (UDS) test with mammalian liver cells in vivo 2017-07-12发布 2018-02-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 15670.21—2017 前言 GB/T15670《农药登记毒理学试验方法》分为以下部分： 第1部分：总则； 第2部分：急性经口毒性试验霍恩氏法； 第3部分：急性经口毒性试验序贯法； 第4部分：急性经口毒性试验 概率单位法； 第5部分：急性经皮毒性试验； 一第6部分：急性吸入毒性试验； 第7部分：皮肤刺激性/腐蚀性试验； 第8部分：急性眼刺激性/腐蚀性试验； 第9部分：皮肤变态反应（致敏）试验； 第10部分：短期重复经口染毒（28天）毒性试验； 第11部分：短期重复经皮染毒（28天）毒性试验； 第12部分：短期重复吸入染毒（28天）毒性试验； 第13部分：亚慢性毒性试验； 第14部分：细菌回复突变试验； 第15部分：体内哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验； 第16部分：体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验； 第17部分：哺乳动物精原细胞/精母细胞染色体畸变试验； 第18部分：啮齿类动物显性致死试验； 第19部分：体外哺乳动物细胞染色体畸变试验； 第20部分：体外哺乳动物细胞基因突变试验； 第21部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS)试验； 第22部分：体外哺乳动物细胞DNA损害与修复/程序外DNA合成试验； 第23部分：致畸试验； 第24部分：两代繁殖毒性试验； 第25部分：急性迟发性神经毒性试验； 第26部分：慢性毒性试验； 第27部分：致癌试验； 第28部分：慢性毒性与致癌合并试验； 第29部分：代谢和毒物动力学试验。 本部分为GB/T15670的第21部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由中华人民共和国农业部提出并归口。 本部分起草单位：农业部农药检定所。 本部分主要起草人：张宏伟、张丽英、陶传江。 1 GB/T 15670.21—2017 农药登记毒理学试验方法 第21部分：体内哺乳动物肝细胞 程序外DNA合成（UDS）试验 1范围 GB/T15670的本部分规定了体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成试验的基本原则、方法和 要求。 本部分适用于为农药登记而进行的体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成试验。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB14925实验动物环境及设施 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 程序外DNA合成unscheduledDNAsynthesis；UDS 发生在细胞周期的S期半保留DNA程序合成之外的DNA合成。 3.2 正修复的细胞 cell in repair 净核银粒高于本实验室历史性阴性对照值的细胞。 3.3 净核银粒netnucleargrain；NNG 在放射自显影UDS试验中细胞内UDS活性的定量测定，计算为核银粒数（NG)减去等于核面积的 细胞质内银粒平均数（CG），即NNGNG一CG。由各细胞计算NNG数，再将一个培养物或平行培养 物中的细胞NNG汇总 4试验目的 体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS)试验用于检测受试物对动物肝细胞诱发DNA修复 的影响。 5 试验概述 体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS)试验是利用哺乳动物进行的体内体细胞遗传毒理学 1 GB/T15670.21—2017 试验，遗传学终点为原发性DNA损伤。 UDS反应的测定取决于DNA损伤部位切除和取代的碱基数。本试验适用于检测“长程修复” （20对～30对碱基），对“短程修复”（1对～3对碱基）的敏感性差。而且，由于DNA损伤未修复、错配 修复或错复制均可引起致突变事件，UDS反应并不完全真实反映DNA修复过程。由于本试验检测整 个基因组，敏感性较高，对本试验提供致突变活性的信息缺乏特异性可能有所补偿。 将新分离哺乳动物肝细胞，移入含有胸腺嘧啶核苷（H-TdR）的培养瓶中，孵育一定时间后，观 察"H-TdR掺人情况。如果受试物造成细胞DNA损伤，必然引起细胞的自主性DNA修复，在修复过 程中"H-TdR整合人DNA链中，造成H-TdR在修复中的掺入。再用放射自显影或液闪计数的方法来 观察掺入H-TdR的量。掺入越多，说明受试物对DNA的损伤越广泛 6试验方法 6.1准备 6.1.1实验动物和饲养环境 一般选用健康初成年的大鼠，在试验开始时，动物体重变异应不超过同性别平均体重的土20%。选 用常规饲料，饮水不限制。如果受试物掺人饲料进行染毒，应选择适当的饲料以保证受试物充分混合。 动物可单独饲养或同性别分小组笼养，实验动物饲养条件应符合GB14925的有关规定。 6.1.2动物试验前准备 试验前动物要在实验动物房环境中至少适应5d时间。将动物随机分为受试物组和对照组。 6.1.3受试物准备 固体受试物应溶于或悬浮于适当的溶剂/赋形剂中，并于动物染毒前稀释。液体受试物可直接染 毒，或在染毒前稀释。应新鲜制备受试物，除非稳定性资料证明可以贮存。 6.1.4溶剂/赋形剂 溶剂/赋形剂在所用剂量水平不应产生毒效应，不应与受试物反应。如使用未充分了解的溶剂/赋 形剂，应有其相容性的资料，推荐首先考虑使用水性溶剂/赋形剂。 6.1.5对照 每个试验都应包括同时进行的阳性对照和阴性（溶剂/赋形剂）对照。除了受试物染毒不同外，对照 组动物应以与染毒组动物相同的方式进行操作。 阳性对照在暴露水平应预期得到超过本底值的UDS增加。阳性对照剂量应使效应很清楚，但并不 使读片者立即发现其为阳性对照标本片。阳性对照的染毒途径可以不同于受试物染毒途径。常用的阳 性对照物见表1。 表 1阳性对照物 采样时间 化学物 CAS号 N-二甲基亚硝胺 早期采样(2h~4 h) 62-75-9 (N-nitrosodimethylamine,NDMA) 2-乙酰氨基芬 晚期采样(12h~16h） 53-96-3 (N-2-acetamidofluorene,2-AAF) 2