ICS 65.100 B 17 中华人民共和国国家标准 GB/T 15670.3—2017 农药登记毒理学试验方法 第3部分：急性经口毒性试验 序贯法 Toxicological test methods for pesticides registration Part 3 : Acute oral toxicity test-Up-and-down-procedure 2017-07-12发布 2018-02-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T15670.3—2017 前言 GB/T15670《农药登记毒理学试验方法》分为以下部分： 第1部分：总则； 第2部分：急性经口毒性试验霍恩氏法； 第3部分：急性经口毒性试验序贯法； 第4部分：急性经口毒性试验概率单位法； 第5部分：急性经皮毒性试验； 一第6部分：急性吸入毒性试验； 第7部分：皮肤刺激性/腐蚀性试验； 第8部分：急性眼刺激性/腐蚀性试验； 第9部分：皮肤变态反应（致敏）试验； 第10部分：短期重复经口染毒（28天）毒性试验； 第11部分：短期重复经皮染毒（28天）毒性试验； 第12部分：短期重复吸入染毒（28天）毒性试验； 第13部分：亚慢性毒性试验； 第14部分：细菌回复突变试验； 第15部分：体内哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验； 第16部分：体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验； 第17部分：哺乳动物精原细胞/精母细胞染色体畸变试验； 第18部分：啮齿类动物显性致死试验； 第19部分：体外哺乳动物细胞染色体畸变试验； 第20部分：体外哺乳动物细胞基因突变试验； 第21部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS)试验； 第22部分：体外哺乳动物细胞DNA损害与修复/程序外DNA合成试验； 第23部分：致畸试验； 第24部分：两代繁殖毒性试验； -第25部分：急性迟发性神经毒性试验； 第26部分：慢性毒性试验； 一第27部分：致癌试验； 第28部分：慢性毒性与致癌合并试验； 第29部分：代谢和毒物动力学试验。 本部分为GB/T15670的第3部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由中华人民共和国农业部提出并归口。 本部分起草单位：农业部农药检定所。 本部分主要起草人：贺锡雯、张丽英、曲、陶传江。 1 GB/T15670.3—2017 农药登记毒理学试验方法 第3部分：急性经口毒性试验 序贯法 1范围 GB/T15670的本部分规定了急性经口毒性试验序贯法的基本原则、方法和要求。 本部分适用于为农药登记而进行的急性经口毒性试验。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB14925实验动物环境及设施 农药登记资料规定（中华人民共和国农业部令【2007第10号） 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 急性经口毒性 acuteoraltoxicity 一次或在24h内多次经口给予实验动物受试物后，动物在短期内出现的健康损害效应。 3.2 剂量dose 所给受试物的量，以实验动物单位体重所接受受试物的质量表示（mg/kg体重）。 3.3 半数致死剂量 medianlethaldose LDs0 一次或在24h内多次给予实验动物受试物后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物统计学剂量。 以实验动物单位体重接受受试物的质量表示（mg/kg体重）。 3.4 剂量-反应关系（ dose-response relationship 剂量与特定效应的发生率间的关系。 4试验目的 急性经口毒性试验是评估受试物毒性的第一步。通过短时间经口染毒初步了解受试物的毒性特征 和剂量-反应关系，为急性毒性分级、标签管理和其他毒理学试验剂量选择提供依据。 5试验概述 C 序贯法（up-and-down-procedure，UDP）是一个阶梯式的染毒程序。使用单一性别的动物，一次染 1 GB/T15670.3—2017 毒一只。第一只动物的染毒剂量最好低于LD50的估计值。后续动物染毒剂量的增减，取决于前一只动 物的染毒结果（存活或死亡）；在不能获得受试物LD5的初步估计值及剂量-反应曲线斜率资料时，计算 机摸拟结果提示起始剂量可选择175mg/kg体重，采用0.5的反对数（对应于一个默认的剂量级数因子 3.2)计算剂量间距。以最大似然法计算LD50的点估计值和95%可信区间。 注：剂量级数因子由剂量-反应曲线斜率的倒数的反对数决定（3.2是斜率为2时的级数因子） 正式试验使用的动物数天约6只～9只。限量试验不超过5只。本方法仅适用于动物染毒后 1d～2d内死亡的受试物，对预期染毒后死亡延迟至5d以上（含5d)的受试物不适用。 6试验方法 6.1受试物 受试物可配制成水溶液、油溶液或悬浮液。尽可能选用水或食用油（如玉米油）作溶剂，其他如羧甲 基纤维素钠、明胶和淀粉可将受试物配制成混悬液或糊剂。除水以外的溶剂，用前应了解其毒理学特 性，必要时设立溶剂对照组。染毒时，不同浓度受试物现用现配。一次染毒容量不超过1mL/100g体 重，水溶液可达到2mL/100g体重，通过调整受试物溶液的浓度，使各剂量组经口染毒的容量一致。如 一次染毒容量太大，可在24h内分2次3次给予。 6.2实验动物 6.2.1种属和性别 啮齿类动物中可选用SD大鼠或Wistar大鼠。单一性别，通常采用雌性动物（应为未妊娠和未经 产的），比较敏感。如有相关结构的化学物的毒理学、代谢和毒物动力学研究证明雄性大鼠更敏感，可选 择后者。 6.2.2年龄和体重 健康成年大鼠鼠龄在8周10周内。动物体重变异不超过动物平均体重的土20%。按随机原则 逐只进入试验。 6.3 饲养环境和条件 动物饲养环境和条件应符合GB14925的有关规定。喂饲常规动物饲料，饮水量不限。试验前，人 选动物在饲养环境中至少检疫、适应3d。 6.4试验步骤 6.4.1限量试验 6.4.1.1受试物的一次染毒剂量为5000mg/kg体重。先给一只动物染毒，在染毒48h内动物存活， 再给2只动物相同的剂量，观察14d，如动物依然存活可终止试验或在给相同剂量的2只动物中，1只 存活1只死亡，再追加2只动物，染毒的5只动物有大于或等于3只动物存活，可结束试验，表明该受试 物的LDso>5000mg/kg体重 6.4.1.2上述5只染毒动物中有3只动物分别在48h内死亡或死亡时间延迟在14d观察期内，终止染 毒，进人正式试验。 6.4.2正式试验 6.4.2.1试验前，大鼠禁食过夜，饮水不限。 2