ICS 65.120 B 46 中华人民共和国国家标准 GB/T13087—2020 代替GB/T13087—1991 饲料中异硫氰酸酯的测定方法 Determination of isothiocyanates in feeds 2021-02-01实施 2020-07-21发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T130872020 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草 本标准代替GB/T13087—1991《饲料中异硫氰酸酯的测定方法》。本标准与GB/T13087—1991 相比，除编辑性修改外，主要技术变化如下： 删除了银量法（见1991年版的第二篇）； 增加了方法的检出限和定量限（见第1章）； 修改了方法的适用范围（见第1章，1991年版的第1章）； 修改了白芥子酶的制备方法（见4.10，1991年版的3.5）； 修改了白芥子酶的用量（见7.1，1991年版的6.1）； 增加了异硫氰酸酯混合标准溶液的配制和应用（见4.12、4.13、7.3和第8章）； 修改了气相色谱测定条件（见7.2，1991年版的6.2）； 修改了测定结果计算公式（见第8章，1991年版的第7章）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任， 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口。 份有限公司。 本标准主要起草人：张凤秤、佟建明、张艳红、李德祥、杨发树 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T13087—1991。 1 GB/T13087—2020 饲料中异硫氰酸酯的测定方法 1范围 本标准规定了饲料中异硫氰酸酯的气相色谱测定方法 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和饲料原料中异硫氰酸酯的测定。 本标准的检出限为2mg/kg，定量限为5mg/kg。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T5520粮油检验发芽试验 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195动物饲料试样的制备 3原理 试样中的硫葡萄糖苷在pH7.0缓冲液中，在白芥子酶作用下生成丙烯基异硫氰酸酯、丁烯基异硫 氰酸酯和戊烯基异硫氰酸酯，用二氯甲烷提取，脱水、过滤后以气相色谱仪测定，内标法定量，结果以丙 烯基异硫氰酸酯计。 试剂或材料 4 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.1水：GB/T6682，一级。 4.2二氯甲烷 4.3石油醚（沸程30℃~60℃）。 4.4无水硫酸钠。 4.5柠檬酸溶液（0.1mol/L)：准确称取4.20g柠檬酸（C,H.O·HzO)溶解于水中，用水稀释并定容 至200mL，混匀。临用现配。 4.6磷酸氢二钠溶液（0.2mol/L）：准确称取28.39g无水磷酸氢二钠（NazHPO,）溶解于水中，用水稀 释并定容至1L，混匀。临用现配 4.7盐酸溶液（0.01mol/L）：准确移取0.9mL浓盐酸，用水稀释并定容至1L，混匀。 4.8氢氧化钠溶液（0.01mol/L）：准确称取0.40g氢氧化钠加水溶解，用水稀释并定容至1L，混匀。 4.9pH7.0缓冲溶液：量取176.5mL柠檬酸溶液（4.5）于1000mL容量瓶中，用磷酸氢二钠溶液（4.6） 稀释并定容至1000mL，混匀，用盐酸溶液（4.7)或氢氧化钠溶液（4.8）调整pH至7.0。临用现配。 4.10白芥子酶：称取50g白芥（SinapisalbaL.）种子（按照GB/T5520做发芽试验，72h内发芽率应 大于85%，保存期不超过两年）粉碎后，置于500mL烧杯中，加入100mL石油醚（4.3），搅拌2min，静 置，弃去上层液体，重复脱脂10次，使脂肪含量低于2%，置通风橱内使溶剂挥干，然后再粉碎一次 1 GB/T13087—2020 酶活性，制备过程中环境温度应保持在30℃以下，两次粉碎注意少量多次，防止粉碎机过热。 4.11丁基异硫氰酸酯内标溶液（0.1mg/mL）：准确称取50mg（精确至0.00001g）丁基异硫氰酸酯 LCH3（CH）3NCS，CAS号：592-82-5，纯度≥99%于500mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷溶解并定容， 混匀，于一18℃以下保存，有效期为3个月。 4.12异硫氰酸酯混合标准溶液（1.0mg/mL）：分别准确称取10mg（精确至0.00001g）丙烯基异硫氰 酸酯［CH²=CHCH,NCS，CAS号：57-06-7，纯度≥99.7%]、丁烯基异硫氰酸酯［CH²= CH,CH,NCS，CAS号：18060-79-2，纯度≥95.0%于10mL棕色容量瓶中，用丁基异硫氰酸酯内标溶 液（4.11）溶解并定容，混匀，于一18℃以下保存，有效期3个月。 4.13异硫氰酸酯混合标准系列工作溶液：精确移取适量异硫氰酸酯混合标准溶液（4.12）于10mL容 量瓶中，用丁基异硫氰酸酯内标溶液（4.11)稀释定容配制成标准系列工作溶液，丙烯基异硫氰酸酯、丁 烯基异硫氰酸酯和戊烯基异硫氰酸酯的浓度分别为0mg/mL、0.001mg/mL、0.02mg/mL、 0.05mg/mL、0.1mg/mL0.5mg/mL、1.0mg/mL。丁基异硫氰酸酯内标浓度均为0.1mg/mL。临用 现配。 4.14定性滤纸：快速，内径7.0cm。 5仪器设备 5.1气相色谱仪：配有氢火焰检测器（FID）。 5.2分析天平：感量0.01g0.0001g和0.00001g。 5.3实验用样品粉碎机。 5.4振荡器：往复，不低于200次/min。 5.5离心机：转速不低于5000r/min。 6样品 按照GB/T20195规定制备试样，至少200g，粉碎使其全部过0.42mm分析筛，混合均匀，装入密 闭容器中，备用。 7试验步骤 7.1试样溶液制备 平行做两份试验。称取约2.0g（精确至0.0001g）试样置于100mL具塞三角瓶中，加入0.5g白 200次/min振荡提取2h，将具塞三角瓶中内容物全部转人离心试管中，5000r/min离心10min，取下 层溶液，用铺有2g～3g无水硫酸钠层的定性滤纸过滤，滤液备用。 7.2气相色谱参考条件 色谱柱：聚乙二醇（FFAP）毛细管柱，长30m，内径0.32mm，膜厚0.25μm，或性能相当者。 色谱柱温度：起始温度100℃，保持10min，以10℃/min升到200℃，保持2min。 进样口温度：220℃。 检测器温度：230℃。 2