ICS71.100.70 CCS Y42 中华人民共和国国家标准 GB/T41683—2022 化妆品中禁用物质秋水仙碱及其衍生物 秋水仙胺的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of prohibited colchicine and its derivative demecoicine in cosmeticsLiquid chromatography-tandemmass spectrometry 2023-05-01实施 2022-10-12发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T41683—2022 前 言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任， 本文件由中国轻工业联合会提出。 本文件由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口。 本文件起草单位：深圳海关食品检验检疫技术中心、深圳市检验检疫科学研究院。 本文件主要起草人：康海宁、沈金灿、赵凤娟、林伟坚、徐婷婷、华红慧、罗耀、陈沛金、谢志榕、 吴章杰、阮子捷、李雅玫 1 GB/T41683—2022 引言 本文件的被测物质是我国《化妆品安全技术规范（2015年版）》规定的禁用原料。 禁用原料是指不得作为化妆品原料使用的物质。《化妆品安全技术规范（2015年版）》规定：若技术 上无法避免禁用物质作为杂质带人化妆品时，国家有限量规定的应符合其规定；未规定限量的，应进行 安全性风险评估，确保在正常、合理及可预见的使用条件下不得对人体健康产生危害。 目前我国尚未规定这些物质的限量值，本文件的制定，仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法。 GB/T41683—2022 化妆品中禁用物质秋水仙碱及其衍生物 秋水仙胺的测定 液相色谱一串联质谱法 警示一一使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有可能的安全问 题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关规定的条件 1范围 原理、试剂和材料、仪器设备、试验步骤、试验数据处理、回收率、精密度等内容。 本文件适用于水基、乳液、膏霜、凝胶、蜡基、粉基类等化妆品中秋水仙碱及其衍生物秋水仙胺的 测定。 本文件的方法检出限和定量限：秋水仙碱和秋水仙胺的检出限均为5.0ug/kg，定量限均为 10.0μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4试验方法 4.1原理 样品经提取液超声提取、离心后，用液相色谱-串联质谱法测定和定性，外标法定量 4.2 试剂和材料 4.2.1 水：GB/T6682，一级 4.2.2 甲醇：色谱纯。 4.2.3 乙腈：色谱纯。 4.2.4无水乙醇：色谱纯。 4.2.5 ：正已烷：色谱纯。 4.2.6 乙酸铵：色谱纯。 4.2.7 乙酸铵：分析纯。 1 GB/T41683—2022 4.2.8甲酸：色谱纯。 4.2.9甲醇乙腈溶液：移取500mL甲醇（4.2.2）至1000mL容量瓶中，用乙腈（4.2.3）定容至刻度，混 匀备用。 4.2.10正已烷饱和甲醇乙睛溶液：用量筒分别量取100mL正已烷（4.2.5）和400mL甲醇乙睛溶液 （4.2.9）置于试剂瓶中振摇，静置分层，除去上层正已烷，下层即为正已烷饱和甲醇乙腈溶液 4.2.115mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）：准确称取0.3854g乙酸铵（4.2.6），加人800mL水溶 解，加入1mL甲酸（4.2.8），转移至1000mL容量瓶中，用水定容至刻度 4.2.12标准物质：秋水仙碱、秋水仙胺英文名称、CAS号、分子式、结构式、相对分子质量见附录A中 表A.1，纯度不小于95%。 4.2.13标准储备液：准确称取适量各标准物质（4.2.12）分别置于50mL容量瓶中，用无水乙醇（4.2.4） 溶解并定容至刻度，分别配制成质量浓度为100mg/L的标准储备液，于一18℃下保存，有效期6个月。 4.31 仪器设备 4.3.1 液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾离子源（ESI）。 4.3.2离心机：转速不低于9500r/min。 4.3.3电子天平：精度为0.0001g和0.001g。 4.3.4 涡旋混合器。 4.3.5 超声波清洗器 4.3.6 有机系微孔滤膜：0.22um。 4.3.7 容量瓶：10mL、50mL、100mL、1000mL。 4.3.8 具塞离心管：15mL、50mL。 4.4 试验步骤 4.4.1 样品溶液制备 4.4.1.1水基、乳液、凝胶、粉基类样品的制备 称取1g（精确至0.001g）样品于10mL容量瓶中，用正已烷饱和甲醇乙睛溶液（4.2.10）定容至刻 度，涡旋混匀，超声提取15min；转移至15mL具塞离心管中，以9500r/min离心5min，取上清液 5.0mL于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀；取5.0mL至15mL离心管中，加入5.0mL正已烷 （4.2.5），涡旋，以9500r/min离心5min，弃去上层正已烷后，移取1.0mL下层清液，过微孔滤膜 （4.3.6），上机测定。 4.4.1.2膏霜类样品的制备 称取1g（精确至0.001g）样品于10mL容量瓶中，加人0.2g乙酸铵（4.2.7），用正已烷饱和甲醇乙 睛溶液（4.2.10）定容至刻度，涡旋混匀，超声提取15min；转移至15mL具塞离心管中，以9500r/min 离心5min，取上清液5.0mL于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀；取5.0mL至15mL离心管 中，加入5.0mL正已烷（4.2.5），涡旋，以9500r/min离心5min，弃去上层正已烷后，移取1.0mL下层 清液，过微孔滤膜（4.3.6），上机测定 4.4.1.3蜡基类样品的制备 称取1g（精确至0.001g）样品于50mL具塞离心管中，准确加人5mL正已烷（4.2.5），涡旋均匀后 准确加入10mL正已烧饱和甲醇乙腈溶液（4.2.10），涡旋混匀，超声提取15min；以9500r/min离心 5min，取下层清液5.0mL于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，混勾；转移至15mL具塞离心管中，以 GB/T41683-—2022 9500r/min离心5min，移取1.0mL清液，过微孔滤膜（4.3.6），上机测定 4.4.1.4平行试验 平行做两份试验。 4.4.2 液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下： a) 色谱柱：Cs柱，100mmX2.1mm（内径），1.7um，或其他效果等同的色谱柱； b) 流动相：A：5mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）（4.2.11），B：甲醇（4.2.2）； c) 流速：0.300mL/min； d) 柱温：40℃； e) 进样量：5μL； f) 梯度洗脱条件见表1。 表 1 液相色谱流动相及参考分离条件 时间/min A/% B/ % 0 90 10 6 5 95 6.5 06 10 10 06 10 4.4.3 串联质谱参考条件 串联质谱参考条件如下： a) 电离方式：电喷雾电离，正离子模式； b) 数据采集：多反应监测（MRM），质谱参数见表2； c) 离子化温度：310℃； d) 辅助气流速：12L/min； e) 喷雾器温度：330℃； f) 鞘气流速：40L/min； g) 电喷雾电压：3500V； h) 碰撞气：氩气，1.5mTorr。 注：1Torr~133Pa。 3 GB/T41683—2022 表2 2化合物的母离子及定量定性离子、碰撞电压和射频电压 母离子 子离子 碰撞电压 射频电压 化合物名称 m/z m/2 V V 310.04* 20 167 秋水仙胺 372.21 341.11 16 167 358.11" 21 185 秋水仙碱 400.21 310.04 25 185 定量离子。 4.4.4标准曲线的绘制 混合标准溶液的配制：分别准确移取1mL标准储备液（4.2.13）至100mL的容量瓶中，用甲醇溶 液（4.2.2）定容至刻度，配制成质量浓度为1mg/L的混合标准溶液，于一18℃下保存，有效期1个月。 取相近的空白样品，按照4.4.1步骤进行处理，用得到的空白样品提取液将混合标准溶液逐级稀释 得到质量浓度为0.500μg/L、1.00μg/L、3.00μg/L、5.00μg/L、10.0μg/L的秋水仙碱、秋水仙胺系列 混合标准工作溶液，质量浓度由低到高进行检测，以定量离子峰面积对质量浓度作图，绘制标准工作 曲线。 秋水仙碱及其衍生物秋水仙胺标准物质选择离子质量色谱图见附录B中图B.1和图B.2 4.4.5试样测定 按照液相色谱和串联质谱参考条件（4.4.2和4.4.3）测定试样溶液（4.4.1）。如果试样中待测物质的 色谱峰保留时间与标准溶液的一致（变化范围在土2.5%），在扣除背景后的试样质谱图中所选择的离子 均出现，而且选择离子的相对丰度与标准物质的进行比较，最大允许偏差不超过表3规定的范围，可判 定为试样中含有对应的待测物。记录日标化合物定量离子色谱峰的峰面积，以外标法定量。试样溶液 中被测物的响应值均应在标准曲线的线性范围之内，超过线性范围则应稀释后再进样测定。 表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度K/% K>50 50≥K>20 20≥K>10 K≤10 最大允