ICS 13.300 CCS A 80 中华人民共和国国家标准 GB/T41622—2022 化学品 大黄蜂急性经口毒性试验 ChemicalsBumblebee acute oral toxicity test 2023-02-01实施 2022-07-11发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T41622—2022 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任， 本文件由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251）提出并归口。 测试技术有限公司、生态环境部南京环境科学研究所、上海市检测中心、上海化工院检测有限公司、上海 市环境科学研究院、贵州省分析测试研究院。 本文件主要起草人：刘纯新、韦洪莲、桑宇、赵虎、梅承芳、杨海荣、窦从从、范德玲、舒耀皋、曾国驱、 陈晓倩、胡双庆、杨鸿波 I GB/T41622—2022 引言 本文件描述了一种用于评估农药和其他化学品对成年大黄蜂工蜂急性经口毒性的实验室试验方 法，以经济合作与发展组织（OECD）化学品测试导则No.213《蜜蜂，急性经口毒性试验》及相关研究为 2015年由OECD国际环比试验小组进行第二次环比试验。在环比试验中使用了欧洲熊蜂（Bombus terrestris）和美洲东部熊蜂（Bombusimpatiens）。该试验方法也适用于其他种类的大黄蜂，但未见 记录。 授粉昆虫（如大黄蜂）可通过接触（直接或间接传粉）或食用含有残留植物保护产品或其他化学品的 食物而暴露于植物保护产品或其他化学品的残留物。为解决经口暴露于化学物质的潜在风险，可在实 验室将成年大黄蜂工蜂暴露于相应的化学物质进行急性经口毒性研究。 为得到满足化学品监管要求的数据，在用本试验方法测试混合物之前，应考虑能否得到满足该目的 的适当结果，以及为什么要得到这样的结果。当监管要求进行混合物试验时，则不用考虑这些，直接进 行混合物试验。 在评价化学物质毒性过程中，当大黄蜂暴露于某种化学物质时，需要测定大黄蜂的急性经口毒性。 通过急性经口毒性试验，测定农药及其他化学物质对大黄蜂的固有毒性。应使用本试验的结果判断是 否需要进一步评价。特别是，基于从实验室毒性试验到半田间试验和田间试验的顺序，这种方法可用于 逐步评估化学品对授粉昆虫的风险。化学品以活性物质或配制产品的形式进行试验 本方法的目的是测定成年工蜂单次暴露于某种化学品后的LD0。试验数据用于适当的授粉生物 风险评估。在授粉生物总体风险评估方案体系中，本方法属于较低层级的试验 GB/T41622—2022 化学品大黄蜂急性经口毒性试验 1范围 本文件规定了化学品大黄蜂急性经口毒性试验的受试物信息、参比物、试验原理、试验准备、试验程 序、质量保证与质量控制、数据与报告。 本文件适用于评价非挥发性化学品和低挥发性化学品对大黄蜂的急性经口毒性 本文件不适用于高挥发性的化学品。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于 本文件。 GB/T21845 化学品水溶解度试验 GB/T21855化学品与pH有关的水解作用试验 GB/T22052用液体蒸气压力计测定液体的蒸气压力 温度关系和初始分解温度的方法 GB/T 22228 GB/T22229 工业用化学品 固体及液体的蒸气压在10-3Pa至1Pa范围内的测定蒸气压平 衡法 OECD化学品测试导则No.104蒸气压（VapourPressure） 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 急性经口毒性 Eacuteoraltoxicity 在最长96h的试验期内，受试物单次经口暴露产生的不良效应。 3.2 剂量dose 受试物的消耗量或使用量。 注：以每蜂摄入受试物的质量表示，即ug/蜂。 3.3 半数致死剂量 medianlethaldose LD5o 单次经口暴露导致50%的受试动物死亡的受试物剂量。 注：经过统计计算得出，以g/蜂表示 3.4 无明显作用剂量 noobservedeffectdose;NOED 未观察到作用剂量 无可观察效应剂量 与对照组相比，死亡率无统计学显著性差异的剂量 1 GB/T41622—2022 4受试物信息 在试验前，应掌握受试物的下列信息： a）纯度； b) 按照GB/T21845方法测定的水中溶解度； c) 受试物在水溶液中的定量分析方法； d) 按照GB/T21855方法测定的水解作用； e 按照GB/T22052、GB/T22228、GB/T22229或OECD化学品测试导则No.104方法测定的 蒸气压和亨利常数。 测定上述参数的温度应在试验报告中予以说明。 5参比物 性。宜选农药乐果作参比物。急性经口暴露条件下，乐果有效成分（a.i.）剂量为4μg/蜂时，受试蜂死亡 率不小于50%。也可使用能使受试蜂表现出预期敏感性的其他有毒参比物。 6试验原理 将成年工蜂暴露于含有受试物的500g/L燕糖水溶液。试验持续时间至少48h。在对照组死亡率 不大于10%时，若至少一个试验组在24h～48h之间死亡率增加不小于10%，应将试验延长至96h。 每天记录死亡率并与对照组结果进行比较。对结果进行分析，计算24h和48h的LDso和NOED值， 以及在试验延长后的72h和96h的LDs和NOED值。 7试验准备 7.1 受试蜂 7.1.1采用成年的大黄蜂（Bombusspp.）工蜂。 注：可选红光熊蜂（Bombusignitus）、明亮熊蜂（BombusLucorum）、小峰熊蜂（Bombushypocrita）等 7.1.2收集中等规模，包括各个发育阶段的幼虫和一只产卵期的蜂王、60只～80只工蜂的大黄蜂蜂群 用于试验。自蜂群到达实验室之日起一周内使用蜂群进行试验。 7.2试验笼具 7.2.1每只大黄蜂在一个独立的笼中单独喂养，防止（没有蜂王的工蜂之间互相攻击引起死亡，并可 准确评价受试蜂受到的影响。 7.2.2使用易于清洁或一次性的、通风良好的笼具。可采用不锈钢、纸板、金属丝网、塑料、木材等合适 的材料制造的笼具。试验笼具的大小应与受试蜂的体型相适应（最小为15cm）。更多信息见附录A。 7.3大黄蜂采集和随机分组 7.3.1在转移到试验笼之前，在红光下（不麻醉）或通过急速冷冻，从蜂群采集成年天黄蜂工蜂。只使 用那些在未去除棉层（如果存在）的蜂群中采集的成年大黄蜂工蜂（详情见附录A）。通过自视检查，去 除体型非常小和特别大的工蜂。幼蜂（可通过灰色的软毛辨识）、雄蜂和蜂王不能用于试验， 2 GB/T41622—2022 7.3.2试验中，对每只受试蜂单独称重，然后随机放人不同试验组， 7.4处理和饲喂 可在红色光或灯光下进行包括试验处理和观察在内的试验操作。将蔗糖溶于水中制备最终浓度为 500g/L的饲喂溶液（例如500g/L的蔗糖水溶液），使用适当的饲喂器（饲喂器可采用剪掉尖端的市售 液。在观察期间，所有受试蜂均自由进食未加受试物的500g/L蔗糖水溶液。 7.5受试蜂的准备 7.5.1受试蜂应在试验条件下（包括单笼饲养）至少驯养8h，自由饮用未加受试物的500g/L的蔗糖 水溶液。在试验开始前一旦发现濒死的大黄蜂，应及时丢弃并用健康的大黄蜂代替。因此，笼具和驯养 工蜂的数量应超过试验所需受试蜂的数量。宜多准备5%的受试蜂和笼具。应额外考虑对非摄食蜂的 补偿，见8.3.5 7.5.2为确保受试蜂在4h内摄人含有受试物的饲喂溶液，受试蜂在暴露前禁食2h～4h。 7.6试验溶液准备 7.6.1将受试物贮备液或受试物与500g/L的蔗糖水溶液混合。对水溶性好的受试物，用水溶解。对 水溶性差的受试物，可用有机溶剂（如丙酮）溶解。根据受试物溶解性选择溶剂的浓度，并将受试物处理 组和溶剂对照组按相同方式处理。如果用丙酮作溶剂，最终饲喂溶液中丙酮的浓度应尽量低，且最大浓 度不应超过5%（体积分数）。只要符合溶剂对照组的有效性要求，也可使用任何其他溶剂、增溶剂或增 稠剂（例如，改善饲喂溶液的均匀度）。 7.6.2通过稀释贮备液或高浓度溶液来准备最终饲喂溶液，即500g/L的蔗糖水溶液。 7.6.3如果使用溶剂、增溶剂、分散剂等来溶解受试物，应制备适当的溶剂对照组溶液。在这种情况 下，应使用两个独立的对照组：一个是500g/L蔗糖水溶液的空白对照组，另一个是含有溶剂、增溶剂、 分散剂等的溶剂对照组，浓度与受试物处理组相同。 7.7受试物分析验证 7.7.1试验期间，饲喂溶液添加受试物后，至少取出一份最低浓度和一份最高浓度的受试物溶液，直接 放在一18℃以下冷冻保存，用于分析受试物实际浓度。如果使用贮备溶液制备饲喂溶液，额外取一份 用于准备饲喂溶液的贮备液冷冻保存，用于分析 7.7.2如果试验期间使用不同批次的受试物，应从每一批次受试物的溶液中分别取出一份最低浓度和 一份最高浓度的受试物溶液，分析每批次受试物实际浓度。宜使用同一批次受试物进行试验。 8试验程序 8.1设置试验组和对照组 8.1.1应先进行预试验，确定正式试验的浓度范围，以选择适当的剂量值。试验浓度以及平行试验个 数的设置应满足LDso及其95%置信限计算的统计学要求。通常按等比设置5个试验浓度，等比系数 不大于2.2，涵盖LD5的剂量范围。应依据“浓度-死亡数”毒性曲线斜率设置试验浓度及个数，并考虑 结果分析时所选用的统