ICS11.040.55 CCS C 44 中华人民共和国国家标准 GB/T41521—2022 多指标核酸恒温扩增检测微流控芯片 通用技术要求 General technical requirement of microfluidic chip for muiti-index nucleic acid isothermal amplification and detection 2022-07-11实施 2022-07-11发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T41521—2022 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任， 本文件由全国生物芯片标准化技术委员会（SAC/TC421）归口。 首都医科大学附属佑安医院、北京大学人民医院、清华大学 本文件主要起草人：潘良斌、邢婉丽、李为民、高占成、程京、辛娟。 GB/T41521—2022 多指标核酸恒温扩增检测微流控芯片 通用技术要求 1范围 本文件规定了多指标核酸恒温扩增检测微流控芯片的分类和命名，要求，试验方法，标志、标签和说 明书，包装、运输和贮存的要求， 本文件适用于以微流控芯片为载体的多指标核酸恒温扩增检测产品。 本文件不适用于含其他生物功能模块的微流控芯片产品，如包含核酸提取、核酸纯化等功能的微流 控生物芯片产品。 2规范性引用文件 2 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 本文件。 GB/T191 包装储运图示标志 GB/T21415一2008体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量 学溯源性 GB/T29791.1体外诊断医疗器械制造商提供的信息（标示）第1部分：术语、定义和通用 要求 3术语和定义 GB/T21415—2008、GB/T29791.1界定的以及下列术语和定义适用于本文件 3.1 微流控芯片 microfluidic chip 以硅、玻璃、金属材料、高分子聚合物等材料为芯片基材，利用微纳加工、精密注塑等加工技术加工 而成，其中包括一个或多个微管道、微阀、微反应池等功能单元，能够完成芯片内液体流动的精准操控， 从而实现某种特定生化反应功能的生物芯片。 ［来源：GB/T27990—2011，2.2.2，有修改 3.2 多指标核酸恒温扩增检测multi-indexnucleicacidisothermalamplificationanddetection 某种方法或产品可对一份样品中的多个（通常为2个以上）待检测核酸靶序列在恒定的温度下同时 进行扩增和检测。 注：待检测核酸靶序列来自细菌、病毒、寄生虫、真菌等某一类别中的多个核酸靶序列，或者来自多个类别中的多个 核酸靶序列。 3.3 多指标核酸恒温扩增检测微流控芯片microfluidicchipformulti-indexnucleicacidisothermal amplificationanddetection 设计有多个并列的微反应池（通常为5个以上）以及连接这些微反应池的微管道，并在微反应池内 1 GB/T41521—2022 包理可与特定待检靶核酸序列进行特异性结合的引物或（和）探针，加人含有待检样本的反应液后，在恒 3.4 阳性质控 positivecontrol 用来质控整个检测过程（如核酸提取、核酸扩增反应等）是否正常的试剂。 注：一般包括阳性对照、内参对照。阳性对照通常包含一段与待检样本无关的核酸制品及可与该核酸制品进行特 异性结合的引物或（和）探针，置于芯片上的微反应池内，用于监测核酸扩增过程是否正常。内参对照通常为 可与特定样本来源（如人体细胞）靶序列进行特异性结合的引物或（和）探针，置于芯片上的微反应池内，用来 监测样本核酸提取等前处理过程是否正常。 3.5 生物相容性 biocampatibility 材料与生物试剂之间相互作用后产生的各种复杂的生物、物理、化学等反应及其对生物反应过程和 反应结果的影响的一种性能。 3.6 透光性 lighttransmission 特定波段的光谱透过芯片材质的能力。 3.7 光强度检测重复性 repeatabilityoflightintensitydetection 对相同种类、质量或体积的同一份标准荧光（或浊度）物质进行多次重复检测，其荧光信号（或浊度 引起的光强变化）检测值的一致性。 3.8 标准荧光物质 normalfluorochrome 由短波长激发光激发，可以释放出可见光的试剂 示例：常见的标准荧光物质有FAM、HEX，VIC、Cy3、ROX、纳米材料、量子点等。 3.9 密封性 leak tightness 芯片及其附属材料防止内装物溢出或其他物质进人的特性。 3.10 准确性 accuracy 测量结果与被测量真值之间的一致性程度。 【来源：GB/T21415—2008，3.1] 3.11 特异性 specificity 能专一检测被测物的试验能力，即当样本中不存在目标核酸时则不会被检出，实际验证中采用假阳 性率进行考核。 3.12 检测限detectionlimit；limitofdetection 最低检测限minimumdetectedconcentration 样本中以一定概率可被检测到的与零有差异的被测量的最低值。 注：本文件中的检出限为区别于零的样本不低于95%检出的最低浓度值。 ［来源：YY/T1182—2020，3.3，有修改】 3.13 重复性 repeatability 在相同测量条件下，在芯片内对多份相同种类、质量或体积的标准核酸样本进行核酸扩增检测，连 2 GB/T41521—2022 续多次测量所得结果之间的一致性 3.14 实时稳定性 stability of real-time aging 长期稳定性longtermstability 芯片及试剂在生产企业规定界限内真实贮存条件下保持其质量特性的能力，超过此期限即认为 失效。 注1：稳定性适用于芯片、生物试剂和参考品的生产、运输、保存和使用。 注2：芯片的稳定性通常用时间量化 3.15 包装运输稳定性stabilityofpackingandtransporting 芯片及试剂在生产企业规定的包装条件下，在指定运输流通过程中保持其质量特性的能力 4分类和命名 4.1分类 按照检测技术可分实时荧光法、终点荧光法、浊度法、显色法检测微流控芯片等：按照样本通量可分 为单样本芯片、二样本芯片、多样本芯片，按照待检靶核酸序列来源，可分为细菌、病毒、寄生虫、真菌核 酸检测微流控芯片等。 4.2命名 点荧光法病毒核酸检测微流控芯片。 5要求 5.1外观 5.1.1芯片及芯片产品外观清洁、无影响产品质量特征的明显划痕、破损等可见缺陷，特别是功能结构 区域。 5.1.2芯片产品包装应外观清洁、无泄漏、无破损，标志、标签字迹清楚 5.2微反应池数量及容积 一张芯片上应设置一个或多个样本检测单元，用来检测一个或多个样本。一个样本检测单元内应 至少包含5个微反应池，各个微反应池的容积可相同或不同，所容纳的液体体积应为0.8uL30uL。 5.3芯片材质透光性 芯片微反应池检测窗口位置对检测波长的光谱的透过性，应不小于芯片自身材料光谱透过率 的80%。 5.4光强度检测重复性 对于荧光检测的芯片，用同一份标准荧光（或浊度）物质进行连续重复性测定，各检测微反应池最后 10次连续荧光信号测量值的变异系数CV应不大于10%。 3 GB/T41521—2022 5.5生物相容性 在正常试验条件下，芯片及其附属材料应不影响生物性能检测结果 5.6 准确性 用阳性参考品和（或）阳性标准品进行测定，相应检测指标的检测结果应为阳性，相应检测指标外的 其他检测指标的检测结果应为阴性。 5.7特异性 特异性应满足以下要求： a)） 用阴性参考品进行测定，检测指标的检测结果应为阴性； b) 用阳性参考品进行测定，相应检测指标的检测结果应为阳性，相应检测指标外的其他检测指标 的检测结果应为阴性 5.8检测限 用检测限参考品进行测定，检出率应不低于95%。 5.9 重复性 用重复性参考品（一份或多份）进行测定，同一批生产的芯片10次平行检测结果一致性应达到 100%且结果准确；3批芯片的30次平行检测结果一致性应达到100%且结果准确。 5.10密封性 用重复性参考品或标准荧光物质进行测定，检测后各芯片应密封性良好，各独立腔室试剂无相互串 扰、无泄露。 5.11工作温度耐受性 芯片及其附属材料在使用工作温度士2℃范围内，且试验时间不少于1.2倍的正常试验条件工作 时间，外观应无形变、无破损，各独立腔室试剂无相互串扰、无泄露，特异性、检测限和重复性的检测结果 应符合相应5.7、5.8、5.9要求 5.12质控设置 每个样本检测单元的微反应池应至少设置阳性质控（1个阳性对照、1个内参对照）和1个阴性对 照，阳性质控和阴性对照的检测结果应准确且符合使用要求 5.13实时稳定性 生产企业应规定产品的有效期，对芯片产品进行真实存储条件下保存至有效期后的实时稳定性。 在有效期内规定的时间间隔对3批芯片成品进行测定，检测结果应符合5.6、5.7、5.8、5.9要求；测试后 的各芯片应密封性良好，各独立腔室试剂无相互串扰、无泄露 5.14包装运输稳定性 生产企业应基于对产品实际运输条件的认知，进行最差条件（最长运输时间、极冷或者极热温度、冲 好，各独立腔室试剂无相互串扰、无泄露。 4 GB/T415