SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4614—2016 国境口岸玛雅罗病毒荧光 RT-PCR 检测方法 Real-time RT-PCR method for Mayaro virus detection at frontier ports 行业标准信息服务平台 2016-08-23发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4614—2016 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：孙肖红、马雪征、刘键、徐宝梁、白红岩、张丽萍 行业标准信息服务平台 1 SN/T4614—2016 国境口岸玛雅罗病毒荧光 RT-PCR检测方法 1范围 本标准规定了玛雅罗病毒检测的生物安全要求、标本的采集、运输和保存，标本的处理和荧光RT- PCR检测。 本标准适用于玛雅罗病毒的荧光RT-PCR检测。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 人间传染的病原微生物名录（中华人民共和国卫生部 卫科教发2006]15号） 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件， 3.1 玛雅罗病毒 Mayarovirus;MAYV 玛雅罗病毒是一种蚊传虫媒病毒，属于披膜病毒科甲病毒属，趋血蚊是其主要传播媒介，主要流行 于澳大利亚。人类感染后临床表现类似登革热，有发热、寒战、头痛、眼睛痛，皮疹和关节炎，在缺乏实验 室诊断时很容易被混淆为登革热。 业标准 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 Ct 值 每个反应管内的荧光信号达到设定的阅值时所经历的循环数； 息服务平台 FAM FAM荧光染料，一种荧光报告基团； RNA 核糖核酸； RT-PCR 反转录-聚合酶链反应。 5 生物安全要求 中华人民共和国卫生计生委发布的《人间传染的病原微生物名录》规定，玛雅罗病毒的未经培养的 感染性物质、灭活材料的操作应在不同级别生物安全实验室进行。具体如下： 玛雅罗病毒相关的感染性材料的操作应在生物安二级（BSL-2或ABSL-2)实验室内进行； 玛雅罗病毒相关的灭活材料在生物安全一级（BSL-1)实验室内进行； 玛雅罗病毒感染性材料运输包装分类为B类，UN编号为UN3373。 1 SN/T 4614—2016 6标本的采集、运输和保存 6.1 人血清标本 无菌采集可疑病人的静脉血3mL～5mL，室温静置30min，然后500g离心10min，收集上清（血 清）于2mL螺口塑料管内，用耐低温油性记号笔记上编号，4℃以下送检。不能及时检测的标本应保存 于一70℃或以下温度。 6.2蚊类 根据实际工作需要采集蚊虫标本。将采集的蚊虫直接放人一20℃冰箱冻死后，取出，分类编号，按 30只～50只一份，装入2mL螺口塑料管内，用耐低温油性记号笔记上编号，干冰或液氮运输，或 一70℃以下保存待检。 7标本的处理 7.1 1人血清标本 血清标本可直接提取核酸。 7.2蚊类 7.2.1从一70℃容器中取出蚊虫标本，倒人研磨器中。 7.2.2加人1mLPBS或生理盐水吹洗，弃去液体后加入1mLPBS或生理盐水，反复研磨至组织碎片 基本消失。 7.2.3将研磨液吸人1.5mL离心管，配平后置预冷4℃的离心机上，20000g离心10min。 7.2.4取上清液提取核酸 行业标准信息服务平台 8荧光RT-PCR检测 8.1 主要仪器 需要以下仪器： 荧光定量PCR仪； 超净工作台； 生物安全柜； 高压灭菌锅； 低温高速离心机：最大离心力20000g； 漩涡振荡器； 冰箱：4℃、-20℃和-70℃； 移液器：10μL、20μL、100μL、200μL和1mL。 2