SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4612—2016 国境口岸丙型肝炎病毒荧光 RT-PCR 检测方法 Detection of viral hepatitis C by real-time fluorescence RT-PCR at frontier ports 行业标准信息服务平台 2016-08-23发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4612—2016 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国四川出人境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人：田绿波、樊学军、史蕾、高国龙、陈肖潇、石莹。 行业标准信息服务平台 1 SN/T 4612—2016 国境口岸内型肝炎病毒荧光 RT-PCR检测方法 1范围 本标准规定了国境口岸丙型肝炎病毒荧光RT-PCR检测的对象，标本的采集、运输和保存，检测程 序及结果报告 本标准适用于国境口岸人出境人员丙型肝炎病毒的实验室检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 SN/T1193基因检验实验室技术要求 WS/T230临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用 人间传染的病原微生物名录（卫生部2006年） 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 丙型肝炎病毒viral hepatitisC 属于黄病毒科，是一种有包膜的RNA病毒 注：主要通过血液、性生活、母婴垂直传播引起丙型病毒性肝炎，其中血液传播是丙肝病毒的主要传播方式。丙型 肝炎呈全球性流行，可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌。临床上急性 丙肝表现为谷丙转氨酶升高，恶心、食欲下降、尿黄、眼黄等症状，慢性丙型肝炎表现为容易疲劳、食欲欠佳、腹 胀等。 3.2 荧光 RT-PCRreal-time fluorescence RT-PCR 在常规RT-PCR的基础上，加入一条特异性的荧光探针，该探针为一条寡核苷酸，两边分别标记一 扩增时，利用Taq酶的5，一3外切酶活性将探针酶切水解，使荧光报告基团和荧光率灭基团分离，从而 荧光监测系统可以接收到荧光信号。每经过一个PCR循环，荧光信号也和目的片段一样，有一个同步 指数增长的过程，信号的强度与检测对象的核酸含量成正比，可根据数学模型计算出检测对象的含量。 3.3 Ct 值 cycle threshold 在荧光RT-PCR扩增过程中，处于指数增长区范围之内的荧光信号值称为阈值（threshold），当扩 增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数称为Ct值 1 SN/T 4612—2016 4缩略语 下列缩略语适用于本文件： HCV:丙型肝炎病毒（HepatitisCVirus)； RT-PCR：逆转录聚合酶链反应（reversetranscription-polymerasechainreaction)； RNA：核糖核酸(ribonucleicacid)； DEPC：焦碳酸二乙酯（diethylpyrocarbonate)； FAM：6-羧基荧光素（6-carboxyfiuorescein)； MGB：小沟结合物，一种荧光淬灭基团（minorgroovebinder）。 5检测对象 5.1人出境体检人员。 5.2其他申请检验的人员。 6生物安全和PCR防污染要求 6.1按照《人间传染的病原微生物名录》中规定，丙型肝炎病毒属第三类病原微生物，病毒培养、未经培 养的感染材料的操作应在生物安全二级（BSL-2）实验室中进行，灭活材料的操作、无感染性材料的操作 可在生物安全一级（BSL-1)实验室中进行。 6.2遵循GB19489处置实验室废弃物。 6.3 3PCR防污染措施按WS/T230和SN/T1193的规定执行。 7 主要仪器 7.1 荧光定量PCR仪及配套PCR反应管。 7.2 生物安全柜。 7.3 冰箱（4℃、-20℃和-70℃）。 7.4普通台式离心机。 高速冷冻离心机（最高离心力12000g以上）。 7.6微量可调移液器（10μL、100μL、200μL、1000μL）及配套带滤芯吸头。 息服务平台 7.7 Eppendorf 管(1.5 mL)。 7.8 涡旋器。 8 主要试剂 8.1核酸提取试剂 用上海之江生物科技股份有限公司核糖核酸（RNA）抽提试剂盒1），内含离心管、收集管、吸附柱、 RNA助沉剂、蛋白酶K、结合缓冲液VG、洗涤液VD、洗涤液VG、洗脱液VG等组分 1）给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可和推荐。如果其他等效产品具有相同的 效果，则可使用这些等效产品。 2