wS 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T63-1996 尿中亚硫基二乙酸的气相色谱测定方法 Urine---Determination of thiodiglycolic acid --Gas chromatographicmethod 标准信息服 1996-10-14发布 1997-05-01实施 中华人民共和国卫生部发布 中华人民共和国卫生行业标准 尿中亚硫基二乙酸的气相色谱测定方法 WS/T63-1996 Urine-Determination of thiodiglycolic acid --Gas chroniatographic method 主题内容与适用范围 本标准规定了尿中亚硫基二乙酸（TDGA）的气相色谱测定方法。本法最低检测浓度为0.25mg/L。 本标准适用于接触氯乙烯的工人尿中亚硫基二乙酸的测定。 2原理 尿样经酸化后蒸至近干，放冷后用甲醇-乙醚混合液溶解亚硫基二乙酸，将溶剂浓缩后，用重氮甲烷 甲酯化，然后进行气相色谱分析，以保留时间定性，峰高定量。 3仪器 3.1气相色谱仪，火焰光度检测器。 3.2微量进样器，10μL。 3.3瓷蒸发血.10mL。 住信息服 3.4刻度离心管.10mL。事先要进行刻度校正，并经硅烷化处理（经1+9二甲基二氮硅烷甲苯液浸 泡，取出晾干，再经300.C烘烤3h）。 3.5分液漏斗，30mL。 3.6具支试管（大型气泡采样管外套管）。 3.7 聚乙烯塑料瓶，100mL。 3.8 尿比重计。 4试剂 本标准所用试剂除另有说明者外，均为分析纯试剂。 4.1 实验用水，蒸馏水或具有同等纯度的去离子水。 4.2# 盐酸，P=1.19g/mL。 4.3# 盐酸溶液，6mol/L。 4.4氢氧化钾溶液，400g/L。 4.5甲醇。 4.6乙醚。 4.7 甲醇-乙醚混合液（2十1）。 4.8E 固定相：聚乙二醇20M。 4.9担体：ChromosorbWAWDMCS.80~100目。 4.10 二甲基二氟硅烷甲苯溶液，1十9。 中华人民共和国卫生部1996-10-14批准 1997-05-01实施 1 WS/T63 1996 4.11生销活甲脉.制备方法见附录A 4.12能品售乙酸.制备方法见附录B 4.13柜硫基乙液标准液：准确称取50mg亚硫基乙酸.用甲醇溶解，在50mL容量瓶中用甲醇稀 择至刻度：此溶液1ml，相当于1mg亚硫基二乙酸，于4（冰箱中至少可使用一个月。临用前用乙稀 成1ml，相当于10g亚硫基二乙酸的标准应用液。 4.14质控样：用加标模拟尿、接触者混合尿或加标的正常人混合尿作质控样。 5采样运输和贮存 用聚乙烯塑料瓶收集接触氯乙烯的工人班后尿或班前尿样，测比重后按约99+1的比例加入盐酸 （4.1)酸化、混勾，于4（冰箱中可保存两周，分析前将尿液彻底混匀。 6分析步骤 6.1仪器操作条件 色谱柱：柱长，2m，内径，3mm，玻璃柱。 固定液：担体=5：100。 柱温：180C。 载气（纯氮）：50mL/min。 燃气（氢气）：60mL/min：助燃气（空气）：70mL/min，氧/氢：0.23。 光电倍增管高压：750V。 6.2样品处理 6.2.1取1mL（或2ml）尿样于蒸发皿内，加0.1ml盐酸（4.2）.混匀。用蒸汽加热使样品蒸发至湿结 晶状态，随即取下放冷至室温。在不断搅拌下或摇动下治蒸发皿四周加入0.3ml（或0.6mL）甲醇-乙 醚混合液（4.6）.使内容物溶脱血壁，加入3mL乙醛（4.5）。将上清液移入刻度离心管中，再用少量乙醛 （每次2~3ml）洗涤残渣两次，合并醚液，于温水浴中（约45C）浓缩至1mL。 6.2.2取约200mg亚硝基甲脲于具支试管中，加0.51mL乙醚，试管口处用橡皮塞与分液漏斗[内 盛氢氧化钾溶液（4.3）联接，通入样品管的玻璃滴管用硅橡胶管与支管相接。打开分液漏十活塞，让氢 氧化钾溶液徐徐下滴，此时重氮甲烷气体就由支管导入样品管底部，使样品发生重氮化反应，直至醚液 变微黄色为止。再放置10min，加入1mL甲醇（4，4），细心在温水浴上赶走过剩的重氮甲烷和乙醚，使 最后体积在室温下定容为1.0ml。 6.3标准曲线的绘制 取6支刻度离心管，按下表配制标准管。 亚硫基二乙酸标准管的制备 管 号 0 1 2 3 4 5 亚硫基二乙酸标准应用液，mL 0.2 0.6 0 0.8 0.4 1.0 1.0 0. 8 0.6 0.4 0. 2 乙.mL 0 TDGA含量μg 8 2 6 10 以下按6.2.2条的分析步骤操作。取2~5μL酯化后的溶液注入色谱仅，测定各管的峰高值。1~5 管的峰高值减去零管值后，取其对数为纵坐标.亚硫基二乙酸含量为横坐标，绘制标准曲线。 6.4样品测定 取按6.2条处理后的2～5L样品溶液注入色谱仪，测定峰高值，减去标准空白（0管）的峰高值， 从标准曲线或回归方程查出或求出样品中亚硫基二乙酸的含量。在测定前后以及每测定10次样品后测 一次质控样。色谐图见下图。 2 WS/T63-1996 TDGA 8ug 5 min 0.1 5min 非接触者 b.加业硫基.乙酸尿 尿样色谱图 7计算 7.1按式（1）计算尿样换算成标准比重（1.020）下的浓度校正系数k。 1.020-1.000 1） 主信息服 7.2按式（2）计算尿中亚硫基二乙酸的浓度。 X=m·k/V 22 式中：X—尿中亚硫基二乙酸的浓度.mg/L m一由标准曲线回归方程计算或查得的亚硫基二乙酸含量·ag： V分析时取尿样量，mL。 8说明 8.1本法的最低检测浓度为0.25mg/L：线性范围0.1~10mg/L：精密度：10%~5.9%（亚硫基二乙 酸浓度2~6mg/L，n=12）；加标回收率：88%~103%（尿中亚硫基二乙酸浓度为2~8mg/l.，n=6）。 8.2火焰光度检测器的响应值的对数值与样品浓度的对数值呈直线关系，所以要用双对数坐标纸或将 数值先经对数处理后用直角坐标纸作标准曲线图 8.3火焰光度检测器开机后需要较长时间才能稳定，所以仪器最好24h连续运转，同时每天需要作标 准曲线和每测定10次样品加一次质控样或标准管进行检套。 8.4样品不宜完全蒸干：乙醚的转移、浓缩，离心管的刻度准确与否以及定容时样液的温度所造成的体 积影响都是测定误差的重要来源。 8.5尿样的采集时间最好是采班后2～10h的尿，或下一个班前晨尿。因其代谢产物在一般环境中不 存在，故样品受污染的可能性很小。 8.6重氮甲烷气体有剧毒，因此一定要在通风柜内操作：重氮甲烷容易爆炸，应严格按操作步骤进行， 实验时应载防护眼镜 8.7质控样使用加标的模拟尿时可考察准确度和精密度，使用接触者尿和加标的正常尿时可考察精密 度。但人尿不易久存。模拟尿只含人尿中的部分主要成分。 3