ICS 11.020 C 62 S 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T 571—2017 裂头终虫幼虫检测 Detectionofdiphyllobothroid larvae 行业标准信息服务平台 2017-08-01发布 2018-02-01实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布 WS/T571—2017 前言 本标准依据GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准起草单位：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、上海出入境检验检疫局、上海市疾 病预防控制中心。 本标准起草人：陈韶红、李树清、张小萍、许学年、卢艳、蔡玉春、张永年、李浩、艾琳、郑彬。 行业标准信息服务平台 WS/T5712017 裂头终虫幼虫检测 1范围 本标准规定了裂头终虫幼虫检测的操作流程 本标准适用于各级疾病预防控制机构、医疗机构和食品检测机构对鱼、蛙和蛇中裂头终虫幼虫的检 测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 GB/T18088出入境动物检疫采样标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 裂头呦plerocercoidlarvae 裂头虫的幼虫，是假叶目（Pseudophyllidea）、裂头科（Diphyllobothriidae）虫第三期幼 虫的总称（参见附录A）。 3.2 信息服务平台 阔节裂头呦plerocercoidlarvaeof Dibothriocepha/us latus或phyllobothriumlatum 寄生在鱼体内阔节裂头絲虫的第三期幼虫。 3.3 曼氏裂头plerocercoidlarvaeofSpirometramansoni 寄生在蛙、蛇或人体内曼氏迭宫终虫的第三期幼虫。 4仪器器材 1 WS/T5712017 4.1 生物显微镜。 4.2 体视显微镜。 4.3 PCR扩增仪。 4.4 电泳仪。 4.5 凝胶成像系统。 4.6 超净工作台。 4.7 高速离心机。 4.8 解剖用手术器械。 5试剂材料 5.1试剂 胃蛋白酶消化液；Tris-乙酸电泳缓冲液（TAE)；琼脂糖凝胶；6X加样缓冲液；100～2000bpDNA marker；灭菌双蒸馏水（ddH20)；70%乙醇（配制见附录B的B.1）。 5.2引物 扩增裂头蝴核糖体DNA转录间隔区（ITS）引物序列；扩增裂头蝴细胞色素C氧化酶（Cox1）引物序 列；阔节裂头坳特异性引物序列及曼氏裂头特异性引物序列（见附录B的B.2）。 5.3 3阳性对照 阳性对照为裂头终虫相应基因片段的阳性克隆质粒或裂头坳、裂头终虫全基因组DNA。 标准信息服务平台 6检测步骤 6.1样品准备 6.1.1样品种类：海鱼、淡水鱼、蛙和蛇。 6.1.2样品采集：采样按照GB/T18088执行。 6.2样品检测 6.2.1 压片检查法 2