ICS 11.020 wS C 50 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T 478—2015 血清25-羟基维生素D3检测操作指南 同位素稀释液相色谱串联质谱法 Operating guidelines for measurement of serum 25-hydroxyvitamin D3- 一 Isotope dilution liquid chromatography tandem mass spectrometry 行业标准信息服务平台 2015-11-06发布 2016-05-01实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 发布 WS/T478—2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准起草单位：首都医科大学附属北京世纪坛医院、中国医学科学院北京协和医院、北京医院 本标准主要起草人：张曼、周慧、邱玲、韩建华、张传宝、张江涛。 行业标准信息服务平台 WS/T478—2015 血清25-羟基维生素D3检测操作指南 同位素稀释液相色谱串联质谱法 1范围 本标准规定了血清25-羟基维生素D3检测的常规方法-同位素稀释液相色谱串联质谱法的技术要 求，包括试剂配制、样本制备、仪器检测、数据分析等内容。 本标准适用于常规实验室利用同位素稀释液相色谱串联质谱法检测血清25-羟基维生素D3。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 内标internalstandard 在定量分析时，加入到试样中能与所有组分完全分离的已知量的纯的化合物。 3.2 检出限limitof detection 由给定测量程序获得的测得值，其声称的物质成分不存在的误判概率为β，声称物质成分存在的误 判概率为α。 信息服务 注1：国际理论和应用化学联合会（IUPAC）推荐α和β的默认值为0.05 注2：有时使用缩写词LOD。 ［JJF1001—2011定义7.18] 3.3 线性linearity 在给定的测量范围内，使测定结果与样本中分析物的量直接成比例的能力。此处的测定结果指最 终的分析结果，而非仪器输出的原始信号。 ［WS/T408—2012定义2.2] 3.4 线性范围 国linearrange 使实验系统的最终分析结果为可接受的线性的浓度范围，此时非线性误差应低于允许误差 ［WS/T408—2012，定义2.3] 3.5 基质效应 matrixeffect 被测量以外的某种样品特性对测量被测量的值的影响。 ［WS/T356—2011，定义2.2] 1 WS/T478—2015 4符号与缩略语 下列符号与缩略语适用于本文件。 25（OH)VDs：25-羟基维生素D（25-HydroxyvitaminD,） BSA：牛血清白蛋白（bovineserumalbumin） CV:变异系数(coefficient ofvariation) LOD：检出限（limitof detection） MRM:多反应监测（multiple reaction monitor) SNR:信噪比(signal to noise ratio) 5检测原理和方法 本标准建立的25（OH)VD，检测方法以同位素稀释液相色谱串联质谱法为检测原理。方法是以稳 定同位素标记的25（OH)VD为内标添加至血清中，内标与血清均匀混合后，用液液萃取等方法提取血 清中25（OH）VD。加人饱和硫酸锌溶液和乙睛沉淀蛋白，加入正已烷并提取上清液，氮气吹干后，经 25（OH）VD，和内标峰面积比计算血清25（OH）VD，浓度。 6试剂和配制 6.1试剂 可选用的试剂如下： a）水：除非有特别说明，应使用GB/T6682定义的一级实验用水； b) 甲醇：色谱纯； 乙腈：色谱纯； d) 正已烧：色谱纯； e) 甲酸：色谱纯； f) 硫酸锌七水合物（ZnSO，·7H,O）：分析纯，CAS号：7446-20-0 g) 四氛代甲醇（d4-甲醇）：纯度≥99.9%，CAS号：811-98-3， 磷酸氢二钠七水合物（Na2HPO7H,O）：分析纯，CAS号：7782-85-6； i) j) 氯化钠：分析纯，CAS号：7647-14-5； k) 牛血清白蛋白（BSA）：纯度≥98%，Mr=66kDa，CAS号：9048-46-8； 1) 氢氧化钠：分析纯，CAS号：1310-73-2。 6.2配制溶液 6.2.1 空白基质溶液 模拟人血清基质的条件，选择适当离子强度、适当pH及蛋白成分的物质进行配制，尽量模拟人血 清基质的环境。如获得人血清纯化后无25（OH）VD的空白基质，则更佳。适用时，可采用下述方法 进行： a) 称量2.140g磷酸氢二钠七水化合物（Na2HPO·7H2O），0.268g磷酸二氢钠一水化合物 2