ICS11.020 C50 备索号：15862-2005 WS 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T246—2005 白细胞分类计数参考方法 Reference leukocyte differential count method 行业标准信息服务平台 2005-05-08发布 2005-12-01实施 中华人民共和国卫生部发布 PDF文件使用"pdfFactoryPro"试用版本创建www.fineprint.cn WS/T246—2005 前 言 为了保证白细胞分类计数结果具有溯源性和准确性，特制定本标准。本标准修改采用了美国国家 临床实验室标准化委员会（NCCLS)颁发的《白细胞分类计数参考方法和仪器评价方法》标准（H20-A）。 本标准从2005年12月1日起实施 本标准的附录A、附录B和附录C都是规范性附录。 本标准由卫生部提出。 本标准由上海市临床检验中心负责起草。 本标准主要起草人：胡晓波、许蕾、宋颖、方心驰、张锦锋。 本标准由卫生部负责解释。 行业标准信息服务平台 PDF文件使用"pdfFactoryPro"试用版本创建www.fineprint.cn WS/T246—2005 白细胞分类计数参考方法 1范围 本标准规定了建立白细胞分类计数参考方法中有关样本采集、血涂片制备的要求、血涂片染色、血 涂片有核细胞检查的步骤、对检验人员的要求和考核等内容。 本标准适用于白细胞分类计数参考方法的建立。 2总则 2.1本标准采用手工目视显微镜计数法作为白细胞分类计数的参考方法。 2.2为了保证参考方法检测结果的精密度和准确性，建立参考方法的实验室必须进行比对。 3方法 3.1样本采集 将静脉血采集于EDTA-K，抗凝剂（液体或粉末状）中（浓度为每毫升血液含1.5~2.2mgEDTA- K，·HzO)。采血后立即混勾，应拒绝分析有肉眼可见凝块的样本。 3.2血涂片制备和要求 3.2.1血涂片制备 3.2.1.1每份样本制作3张血涂片。要求所用玻片清洁、干燥、无尘，大小为25mm×75mm，厚度为 0.8~1.2mm。并有明确标记。如果样本中白细胞数量少时，需要制备更多血涂片（如6张）。 3.2.1.2使用EDTA-K，抗凝血液样本时.应在采集后4小时内制备血涂片。在制片前，样本应充分 混匀。注意，样本不能冷藏。 3.2.1.3用楔形技术制备血涂片。在玻片近一端1/3处，加一滴（约0.05ml)充分混勾的血液，握住另 一张较狭窄的、边缘光滑的推片，以30°～45°角使血滴沿推片迅速散开，快速、平稳地推动推片至玻片的 另一端（图1）。 血涂片尾部， 血涂片体部的 血涂片头部 涂片太薄 检查区域 涂片太厚 血膜至玻片一端 约为总长1/3 血膜至玻片边缘约5mm 红细胞分布较疏 红细胞分布较密 图1外周血涂片制作方法和“城垛式”血涂片检查方法 1 PDF文件使用"pdfFactoryPro"试用版本创建www.fineprint.cn WS/T246-2005 3.2.1.4在1小时内，用Romanowsky类型染液染色：或在1小时内，用无水甲醇（含水量<3%）固定 后染色， 3.2.2良好血涂片的要求 3.2.2.1血膜至少长25mm，至玻片两侧边缘的距离至少为5mm。 3.2.2.2 血膜边缘要比玻片边缘窄，且边缘光滑，适用于油镜检查 3.2.2.3 血细胞从厚区到薄区逐步均勾分布，末端呈方形或羽毛状。 3.2.2.4血膜末端无粒状，划线或裂隙。所有这些情况会使白细胞集中在这些区域内 3.2.2.5在镜检区域内，白细胞形态应无人为异常改变。通常·随着保存时间的延长，抗凝血会造成白 细胞形态的改变，如胞浆内形成空泡，核分解破刺 应收抗凝血液保存时间的影响减小到最低限度 除部分淋巴细胞增生性疾病外，镜检区域内 破损白细胞量应<2 3.2.2.6无人为污染。 3.3血涂片染色 采用Romanowsky类 类染料由亚甲蓝和/或业甲蓝氧化产物（天青B），和 wsk 组成 卤化荧光素（通常为伊 准确整别成熟和未成熟人细胞或异常细胞。 好的染色能 3.3.1染料的性能 Romanowsky类 质量直接 染色效果 在pH6.4 7.0条件下，染科与细胞中特定成分 （细胞核和细胞浆特 典型的色，如细胞核染深紫色，红细胞杂鲜亮的橙红色。 立相互作用 3.3.2可接受的染色况 粒细胞、单核 林巴细胞和其他细胞必须能显示精晰的核浆分界，能识别核染色质成分和细胞 浆的颜色差异。 3.4需分类的外 周四有核细胞 外周血可见 核细胞。常见的有，中性分叶核粒细胞 多种 中性杆状核粒细胞、淋巴细胞、异型淋巴 细胞、单核细胞、 粒细胞和嗜碱性粒细胞。外周血中正常 自细胞的形态描坐见附录A 外周血中少 他有核细胞在专业的血液学教科书和图普中均有描述，本标准中不再叙述。 3.5血涂片检查步 3.5.1血涂片显微钉 3.5.1.1首先在低 （10~40倍）进行刚览，观察有无异常细胞和细胞分布情兑。然后，在100倍 油镜下，观察细胞浆肉 和核分叶情况， 3.5.1.2检查从约5 细胞互相重香区域开始·向红细胞完全散开的区域推移。血涂片较薄的 区域，呈羽毛状，为血片边象” 3.5.1.3中性粒细胞，单， 细 抱淋 分布均勾的区域为血渝片分类可接受”区域。当白细胞总 3.5.1.4除某些病理情况（如便性淋巴随门血病外吸碎细胞或不能识别细胞的数量不超过白细胞 总数的2%。若破碎细胞仍能明确鉴别（如破碎的嗜酸性粒细炮应包括在分类计数中。在结果报告 中，应设其他栏，以备填写破碎细胞或不能识别细胞，并作适当描述。 3.5.2计数方法 3.5.2.1采用*城垛式”方法检查血涂片（图1）。每个明确识别的细胞必须归人下列分类中：中性分叶 核粒细胞：中性杆状核粒细胞：淋巴细胞：异型淋巴细胞：单核细胞；嗜酸性粒细胞：嗜减性粒细胞：其他 有核细胞（除有核红细胞外）。能明确识别的破碎细胞，应恰当分类。 3.5.2.2每张血涂片应计数200个白细胞，若样本中白细胞数量减少，应增加检查血涂片的数量。 3.5.2.3白细胞分类结果以百分率和绝对值表示。 3.5.2.4计数所有的有核红细胞，结果以每100个白细胞计数中见到几个表示。 3.6检验人员要求和考核 2 PDF文件使用"pdfFactoryPro"试用版本创建www.fineprint.cn