093 备案号：944—2000 WS 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T187—1999 淋巴细胞微核估算受照剂量方法 Method of peripheral lymphocyte micronucleus assay for estimating doses exposed 行业标准信息服务平台 1999-12-09发布 2000-05-01实施 中华人民共和国卫生部发布 WS/T187-1999 前 言 本标准是为了进一步解决在辐射事故时早期剂量的估算问题。借鉴国内外有关实验资料和临床实 践经验，结合我国实际情况编制而成。 本标准主要包括在外照射事故条件下，用外周血淋巴细胞微核估算受照剂量的方法。 本标准从2000年5月1日起实施。 本标准附录A是提示的附录。 本标准由卫生部卫生法制与监督司提出。 本标准起草单位：卫生部工业卫生实验所、军事医学科学院307医院。 本标准主要起草人：白玉书、蒋本荣。 本标准由卫生部委托中国医学科学院放射医学研究所负责解释。 行业标准信息服务平台 I 中华人民共和国卫生行业标准 淋巴细胞微核估算受照剂量方法 WS/T187-1999 Method of peripheral lymphocyte micronucleus assay for estimating doses exposed 1范围 本标准给出了电离辐射诱发人外周血淋巴细胞微核的剂量-效应曲线的建立和用其估算生物剂量 的方法。 本标准适用于急性外照射事故受照人员的剂量估算。 本标准不适用于分次照射、长期小剂量照射和内照射的生物剂量估算。 2定义 本标准采用下列定义。 2.1生物剂量计biologicaldosimeter 用以估算受照剂量的生物体系，该生物体系受到照射后的反应与受照剂量之间存在着某种定量关 系，从而可用来推定受照剂量。 2.2剂量-效应曲线dose-responsecurve 某种物质或生物体系受到照射后的反应与受照剂量之间存在着某种定量关系，可用适当的数学模 式表述，所制备出相应的刻度曲线。可用其估算受照剂量。 2.3微核micronucleus 由细胞分裂后期滞后的染色体断片、一个或多个染色体组成的小体。可作为剂量估算的指标。 2.4胞质分裂阻断微核法cytokinesis-blockmicronucleusmethod（CB微核法） 在培养的淋巴细胞完成第一次有丝分裂前，向培养体系中加松胞素-B，所见到的双核淋巴细胞（双 核CB细胞）就是第一次有丝分裂（M）细胞。观察双核CB细胞中微核的方法即CB微核法。 注：本标准所用外周血淋巴细胞微核分析方法限于CB微核法。 2.5松胞素-Bcytochalasin-BCyt-B 一种霉菌代谢产物，从培养黑蛛网状长蠕孢的过滤物中得到的结晶粉，在0℃以下避光、干燥储存， 易溶于二甲基亚砜，在培养体系中适宜的浓度可以抑制细胞运动和胞质分裂，而不影响胞核分裂，浓度 过高可引起胞膜破裂。 2.6微核细胞micronucleuscell 胞质中含有微核的双核淋巴细胞。 3剂量-效应曲线的建立方法 3.1照射条件和培养方法 3.1.1必须提供可靠的、明确的物理剂量。受照标本应与照射源保持一定的距离以达到均匀照射的目 的。在0.1~5.0G，的剂量范围内，剂量率最好大于0.3G，/min，小于1.0G/min，至少要选择8个剂量 点。 中华人民共和国卫生部1999-12-09批准 2000-05-01实施 1 WS/T187-1999 3.1.2选择2～3名成年健康人血样，在37℃士0.5℃条件下进行离体照射，照后在上述温度下放置 100min左右，然后采用CB微核法培养、制片，得到可供分析的双核CB细胞。 3.2计数分析技术 3.2.1微核的判断标准 微核是游离于胞质中，与主核完全分开（如有重叠或相切，必须看到各自的完整核膜），呈圆形或椭 圆型，结构与主核相同，着色与主核一致或略浅，不折光，大小为主核三分之一以下的小核。 3.2.2计数和分析 盲法阅片。观察双核CB细胞，如发现微核，应记下显微镜坐标，以备审核或照相。一个完整的记录 应标明标本号、显微镜号、观察者、制样和观察日期、分析细胞数、微核细胞和微核数，以千分数（%）表 示。 3.2.3分析细胞数 按式（1）计算各剂量点应分析的细胞数。 (1) 式中：力一一微核细胞率，p可在计数到一定数量的细胞后求得， n——应分析的细胞数 3.3剂量-效应曲线的拟合 3.3.1根据下列四种数学模式进行曲线拟合 a）线性模式 即y =ai+b,D a+bD .....(2) b）二次方程模式 f(D)=a2 +D2 ·3) c）二次多项式模式 f(D) 即y-a+6D+cD a+6D+cD2 ....(4) d）幂函数模式 f(D) = a + b,D* 当a=0时y=D ....(5) 式中：y 微核细胞率或微核率，%； D- 照射剂量，Gy a——本底率； b,c——回归系数； k—常数； 一幕次。 2 3.3.2剂量-效应曲线回归方程式的拟合步骤： 首先将所得数据在算术格纸上作散点图，然后根据不同图像决定采用的数学模式： a）在算术格纸上散点图呈直线趋势的可采用y=a十bD模式。 b）在算术格纸上散点图呈曲线趋势，而在双对数纸上呈直线的，可采用y=kD模式。 c）在算术及双对数格纸上散点图都不能直线化，而呈抛物线形式，可采用y=a+bD十cD?模式 d）当y=kD中n=2，或y=a十bD+cD中的bD=0时，可采用y=a十cD模式。 可以通过解方程式方法或用微机计算回归系数。应检验回归系数的显著性和曲线的拟合度。估算 剂量多以微核率作为指标，对低LET辐射，多适于拟合二次多项式（y=a十6D+cD）。而高LET辐射 多适于直线方程式（y=a十bD）。 2