ICS71.040.40 Y 43 中华人民共和国国家标准 GB/T 40185—2021 牙膏中5种氯铵类抗菌剂的检测方法 高效液相色谱法 Determination of 5 kinds of ammonium chloride antibacterial agents in toothpaste- High performance liquid chromatography method 2021-12-01实施 2021-05-21发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T 40185—2021 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国口腔护理用品标准化技术委员会（SAC/TC492）归口。 本标准起草单位：江苏省产品质量监督检验研究院、南京大学、江苏省食品药品监督检验研究院、昆 山市产品质量监督检验所。 本标准主要起草人：蔡晶、王峰、施劲松、乔俊琴、邱霞琴、朱宇宏、张征、韦兰春、刘小兰、练鸿振、 王莉、张晓强、洪华。 1 GB/T 40185—2021 牙膏中5种氯铵类抗菌剂的检测方法 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了牙膏中氯铵类抗菌剂劳拉氯铵、苄索氯铵、西吡氯铵、米他氯铵、西他氯铵含量的高效 液相色谱（HPLC）测定方法。 本标准适用于牙膏中5种氯铵类抗菌剂含量的测定， 本标准的方法检出限为0.075g/kg（劳拉氯铵、苄索氯铵），0.0125g/kg（西吡氯铵、米他氯铵）和 0.025g/kg（西他氯铵）。 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682一2008分析实验室用水规格和试验方法 3原理 样品经过水和乙醇超声提取、过滤后，以高效液相色谱法进行分离，紫外测定，外标法定量。 4试剂和标准物质 4.1乙睛：色谱纯。 4.2无水乙醇。 4.3 高氯酸。 劳拉氯铵、芋索氯铵、西吡氯铵、米他氯铵和西他氯铵（标准品）：纯度≥98%。 仪器设备 5.1 高效液相色谱仪，配备二极管阵列检测器。 5.2走 超声波清洗器。 5.3 涡旋振荡器。 5.4 分析天平（感量0.0001g）。 5.5 0.45um有机系样品滤膜。 6 分析步骤 6.1 试样预处理 称取样品1g，精确至0.001g，置于25mL容量瓶中，加人10mL水，超声提取20min后，加人10ml 1 GB/T401852021 无水乙醇（4.2）超声20min，待样品冷却后用乙醇定容至刻度，混匀。取部分上清液离心后，经0.45μm 滤膜过滤，滤液作为待测样液，备用。 6.2标准溶液配制 准确称取劳拉氯铵、苄索氯铵、西吡氯铵、米他氯铵和西他氯铵标准品各0.05g，精确至0.0001g， 加入25mL乙醇超声溶解，待完全溶解后用水定容至50mL。此溶液标准品含量为1mg/mL，作为标 准储备液 取标准储备液，用乙醇：水=1：1稀释成浓度为0.2mg/mL，0.1mg/mL，0.05mg/mL，0.02mg/mL， 0.01mg/mL,0.005mg/mL,0.003mg/mL,0.002mg/mL,0.0015mg/mL,0.001mg/mL,0.0005mg/mL, 0.0003mg/mL的标准工作溶液，备用。 6.3测定 6.3.1液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下： a)1 色谱柱：CN柱（150X4.6mm，5μm）。 b) 流动相：乙睛（A）十0.1%HCIO.水溶液（1L水中加人1mLHCIO4）（B），采用等度洗脱： A/B=40：60（体积比）。 c） 流速：1.0mL/min。 d) 进样量：10μL。 柱温：30℃。 f) 检测波长：215nm（劳拉氯铵、米他氯铵和西他氯铵）、225nm（苄索氯铵）、260nm（西吡氯铵）。 6.3.2标准工作曲线绘制 按照液相色谱条件（6.3.1）进行测定，劳拉氯铵和苄索氯铵的线性范围为0.001mg/mL～ 0.2mg/mL，西吡氯铵和米他氯铵的线性范围为0.0015mg/mL～0.2mg/mL，西他氯铵的线性范围为 0.003mg/mL~0.2mg/mL。5种混合标准物质液相色谱图参见附录A的图A.1~图A.3。 6.3.3定量分析 待测样液按照液相色谱条件（6.3.1）进行测定，以峰面积与标准系列比较进行定量，如试样液响应 值超出标准系列响应值，则需将试样稀释适宜倍数后进样 6.3.4定性确证 以标准溶液中被测组分的保留时间为依据进行初步定性，测定过程中如果试样液出现阳性结果，应 与标准品的紫外吸收光谱对比，进行定性确证。 6.4空白试验 除不称取样品外，均按上述操作步骤进行。 7分析结果的表述 劳拉氯铵、芋索氯铵、西吡氯铵、米他氯铵和西他氯铵的含量按式（1）进行计算。 2 GB/T40185—2021 ..(1) mx1000 式中： X一劳拉氯铵、苄索氯铵、西吡氯铵、米他氯铵和西他氯铵的含量，单位为克每千克（g/kg）； —一从标准工作曲线上得到的被测组分溶液质量浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）： V一一样品定容体积，单位为毫升（mL）； m试样的质量，单位为克（g）。 试验结果以平行测定结果的算数平均值为准。 8 3精密度 在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对值不得超过算术平均值的10%。 9 回收率 按本测定方法所确定的实验条件，劳拉氯铵、索氯铵的添加浓度为0.00lmg/mL、0.002mg/mL、 0.005mg/mL，西吡氯铵、米他氯铵的添加浓度为0.0015mg/mL0.003mg/mL.0.0075mg/mL，西他 氯铵的添加浓度为0.003mg/mL、0.006mg/mL、0.015mg/mL，每个浓度添加三次测定，回收率为 85%115%，相对标准偏差小于10%。 SAG 3 GB/T40185—2021 附录A （资料性附录） 劳拉氯铵、芒索氯铵、西吡氯铵、米他氯铵、西他氯铵标准物质液相色谱图 劳拉氯铵、米他氯铵和西他氯铵标准物质液相色谱图参见图A,1。 16 12 - nu 14. 31 22.14 10 20 25 30 35 15 40f/min 说明： 1——劳拉氯铵； 2——米他氯铵； 3——西他氯铵。 图A.1 劳拉氯铵、米他氯铵和西他氯铵标准物质液相色谱图 芊索氯铵标准物质液相色谱图参见图A2。 16 12 - 15.36 nAU 20 25 30 35 10 15 0 5 10 t/min 说明： 苄索氯铵。 图 A.2 苄索氯铵标准物质液相色谱图 4 GB/T 40185—2021 西吡氯铵标准物质液相色谱图参见图A.3。 16 - 12 mAll 8- 18.16 4 - 10 15 20 25 30 0 35 40 t/min 5 说明： 1- 一西吡氯铵。 图A.3 西吡氯铵标准物质液相色谱图 5