ICS 71.100.40 Y 43 中华人民共和国国家标准 GB/T 38741—2020 口腔清洁护理用品牙膏中氯已定、呋喃 西林、双氯芬酸、氯二甲酚和已胖定二 （羟乙基磺酸）盐5种杀菌剂含量的测定 高效液相色谱法 Oral care and cleansing productsDetermination of chlorhexidine,furacin, diclofenac,chloroxylenol and hexamidine diisethionate in toothpastes- High performance liquid chromatography 2020-04-28发布 2020-11-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T387412020 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国口腔护理用品标准化技术委员会（SAC/TC492）归口。 本标准起草单位：苏州世谱检测技术有限公司、广州华鑫检测技术有限公司、苏州绿叶日用品有限 公司、苏州质量检测科学研究院、广州质量监督检测研究院、黑龙江省轻工科学研究院、青蛙王子（中国） 日化有限公司、无限极（中国）有限公司、江苏省产品质量监督检验研究院、河北省食品检验研究院、江苏 省食品药品监督检验研究院、江苏省药品监督管理局苏州检查分局、苏州市药品检验检测研究中心、常 州市食品药品监督检验中心、常州检验检测标准认证研究院。 本标准主要起草人：寻知庆、宋淑文、叶竹洪、刘冬、代丹、尚维、王景、孟玉、张征、张岩、陈杰峰、 孙红梅、温文忠、周奇、褚叶果、陈卫、李红玉、李颖怡、施兵、汪晨霞、李冬亮、郭燕华、朱丹丹、郭新东、 吴玉銮、黄志宁、刘群林、高红影、朱钇蓉、周飞、吴燕鹏、郭梦婷、卢剑。 GB/T38741—2020 口腔清洁护理用品牙膏中氯己定、味喃 西林、双氯芬酸、氯二甲酚和已胖定二 （羟乙基磺酸）盐5种杀菌剂含量的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了牙膏中氯已定、呋喃西林、双氯芬酸、氯二甲酚和已胖定二（羟乙基磺酸）盐5种杀菌 剂含量的高效液相色谱法测定的原理、试剂或材料、仪器设备、试验步骤、试验数据处理、检出限与定量 限、回收率和精密度。 本标准适用于牙膏中氯已定、呋喃西林、双氯芬酸、氯二甲酚和已胖定二（羟乙基磺酸）盐含量的 测定。 2规范性引用文件 SZIG 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 试样经甲酸-甲醇-水混合溶液超声提取后，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法定量 4试剂或材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲酸：色谱纯。 4.2 2三氟乙酸：色谱纯。 4.3 甲醇：色谱级。 4.4 0.1%甲酸甲醇溶液：准确移取1mL甲酸（见4.1），用甲醇（见4.3）稀释至1L。 4.5 0.1%甲酸溶液：准确移取1mL甲酸（见4.1）,用水稀释至1L。 4.5），混匀。 4.70.1%三氟乙酸甲醇溶液：准确移取1mL三氟乙酸（见4.2），用甲醇（见4.3）稀释至1L。 4.9标准物质：氯已定、呋喃西林、双氯芬酸、氯二甲酚和已胖定二（羟乙基磺酸）盐，纯度≥98%，其中 文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量及结构式见附录A中表A.1。 4.10标准贮备液（各为1000mg/L）：准确称取已胖定二（羟乙基磺酸）盐标准物质（见4.9）0.1g（精确 至0.1mg），置于100mL棕色容量瓶中，用水溶解并定容。准确称取氯已定、呋喃西林、双氯芬酸、氯二 1 GB/T38741—2020 甲酚标准物质（见4.9）各0.1g（精确至0.1mg），分别置于100mL棕色容量瓶中，用甲醇（见4.3）溶解 并定容。于0℃～4℃避光条件下保存，保存期不超过3个月。 4.11混合标准中间工作溶液（各为100mg/L）：准确移取氯已定、喃西林、双氯芬酸、氯二甲酚和已 定二（羟乙基磺酸）盐标准贮备液（见4.10）各1mL，置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇（见4.3）稀释 并定容，现配现用。 4.12滤膜：孔径为0.22μm的有机过滤膜。 5仪器设备 5.1高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。 5.2分析天平：感量0.001g和0.0001g。 5.3离心机：最高转速不低于10000r/min。 5.4超声波清洗仪：工作功率不低于40kHz。 5.5 5旋涡振荡器。 6试验步骤 6.1试样处理 准确称取1.0g（精确至0.001g）试样，置于15mL具塞离心管中，加人5.0mL甲酸-甲醇-水混合 溶液（见4.6），于旋涡振荡器上振荡混匀后，超声提取15min，冷却至室温，转移至10mL容量瓶中。用 3mL甲酸-甲醇-水混合溶液（见4.6）分2次洗涤离心管，洗涤液转移至容量瓶中，然后用甲酸-甲醇-水 后，待高效液相色谱仪测定。 6.2 液相色谱参考工作条件 液相色谱参考工作条件如下： a） 色谱柱：Cig柱，5μm，150mmX4.6mm（内径）； b) 流动相：A：0.1%三氟乙酸甲醇溶液（见4.7），B：0.1%三氟乙酸溶液（见4.8），梯度洗脱条件见 表1; c) 流量：1.0mL/min； 柱温：30℃； e) 进样量：20μL； f) 波长：280nm。 表1梯度洗脱条件 时间/min 流动相A/% 流动相 B/% 0.0 30 70 2.0 30 70 10.0 50 50 20.0 80 20 2 SAC GB/T 38741—2020 表1 (续) 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 22.0 80 20 23.0 30 70 25.0 30 70 6.3 3标准工作曲线制作 用甲酸-甲醇-水混合溶液（见4.6）逐级稀释混合标准中间工作溶液（见4.11），得到质量浓度为 0.50mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L系列混合标准工作 溶液，按色谱条件（见6.2）进行测定，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标作图，制作标准工作曲线。 标准溶液的液相色谱图参见附录B中图B.1。 6.4试样测定 按色谱条件（见6.2）测定试样溶液（见6.1），如果检出的色谱峰的保留时间与标准物质的一致，并且 在扣除背景后的样品色谱图中，该物质的光谱图与标准物质的一致（参见图B.2），可初步认定样品为阳 性样品。记录色谱峰的峰面积，以外标法定量。试样溶液中被测物的响应值应在标准工作曲线的线性 范围之内，超出线性范围的试样溶液可用甲酸-甲醇-水混合溶液（见4.6）稀释后进行测定。需要时，可 采用高效液相色谱-质谱/质谱法进行确证实验，参见附录C。 6.5 5空白试验 除不称取试样外，均按6.1～6.4进行测定。 7试验数据处理 试样中各待测组分的含量，计算见公式（1）： (p:-po)xVx1 000 X .(1) m ×1 000 式中： X；一一试样中被测组分的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 试样溶液中被测组分的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； 空白试验溶液中被测组分的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； Po V 一定容体积，单位为毫升（mL）； 试样质量，单位为克（g）； f试样稀释倍数。 8检出限与定量限 氯已定、呋喃西林、双氯芬酸和已胖定二（羟乙基磺酸）盐的方法检出限均为2.50mg/kg，定量下限 均为5.00mg/kg。氯二甲酚的方法检出限为5.00mg/kg，定量下限为10.0mg/kg。 3 GB/T38741—2020 9 回收率 氯已定、呋喃西林、双氯芬酸和已胖定二（羟乙基磺酸）盐在添加浓度5.00mg/kg~50.0mg/kg范 围内，氯二甲酚在添加浓度10.0mg/kg~100mg/kg范围内，回收率均在80%~110%之间。 10 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 4 GB/T38741—2020 附录A （规范性附录） 标准物质信息 标准物质的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量及化学结构式，见表A.1。 表 A.1 标准物质的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量及化学结构式 序 相对分 中文名称 英文名称 CAS号 分子式 化学结构式 号 子质量 C H 55-56-1 CaHoClzNio 氯己定 Chlorhexidine 505.45 NH NH CI ON. NIL2 呋喃西林 Furacin 59-87-0 CH, N,O4 198.14 双氯芬酸 Diclofenac 644-62-2CI,HnCl,NO2 296.15 3 OH 氯二甲酚 Chloroxylenol 88-04-0 C, H, CIO 156.61 T. 已定二 Hexamidine C2 H2 N, O: （羟乙基磺 659-40-5 606.71 2C,H,O,S diisethionate HaN 酸)盐 NII 0. -011 O..OH 110 HO 5