ICS11.020 C50 备案号：15861—2005 WS 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T245—2005 红细胞和白细胞计数参考方法 Reference method for the enumeration of erythrocytesand leucocytes 行业标准信息服务平台 2005-05-08发布 2005-12-01实施 中华人民共和国卫生部发布 PDF文件使用"pdfFactoryPro试用版本创建www.fineprint.cn WS/T245—2005 前 言 为了保证红细胞和白细胞的计数结果具有溯源性和准确性，特制定本标准。 本标准从2005年12月1.日起实施。 木标准由卫生部提出。 本标准起草单位：卫生部临床检验中心。 本标准主要起草人：彭明婷、申子瑜、谷小林、陆红、杨振华。 本标准由卫生部负责解释。 行业标准信息服务平台 PDF文件使用"pdfFactoryPro试用版本创建www.fineprint.cn WS/T245—2005 红细胞和白细胞计数参考方法 1范围 本标准规定了建立红细胞和白细胞计数参考方法的技术要求。 本标准适用于红细胞和白细胞计数参考方法的建立。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 参考方法（Referencemethod) 一种可清楚和准确描述的用于特定检测的技术，该技术要有依据，可提供高度准确和精密的实验数 据以评价其他实验方法检测结果的有效性。若有决定性方法，参考方法的准确性必须与决定性方法进 行比较。参考方法应溯源至一级计量标准并且须标示不准确度和不精密度。 3总则 3.1要求使用单通道、阻抗原理的半自动电子计数仪来建立红细胞和白细胞计数的参考方法。 3.2为了保证参考方法检测结果的精密度和准确性，建立参考方法的实验室之间必须进行比对。 4红细胞和白细胞计数参考方法的一般技术要求 4.1血标本 4.1.1用符合要求的塑料注射器或真空采血系统采集新鲜静脉血标本。标本中不得有肉眼可见的溶 血或小凝块。 4.1.2标本的收集要求使用EDTA二钾作为抗凝剂，抗凝剂的浓度为3.7~5.4μmol/ml血（1.5~ 2.2mg/ml血），盛有标本的试管应有足够的剩余空间以便于血标本的混匀操作。 4.1.3标本应置于18℃~22℃的温度条件下直至检测。 4.1.4标本采集到标本检测的时间间陷应不超过4小时。 4.1.5检测前应轻轻地颠倒盛有标本的试管，以便将标本充分混勾。 4.2加样器 要求使用经过校准的移液器，不准确度主0.5%。其不准确度应溯源至一级计量标准。 4.3容量瓶 要求使用硅玻璃制成的一级容量瓶。每个容量瓶应有经国家标准计量机构检定的标示体积，其 不准确度为土1%。 4.4计数杯 4.4.1计数杯的体积应有10ml。 4.4.2计数杯应有足够的高度以保证在计数前电子细胞计数仪小孔管的小孔约在液体高度一半的位 置，完成计数后在小孔上方至少有1cm的液体高度。 4.4.3使用前要保持计数杯的清洁，无化学污染物和颗粒物。 4.4.4须确认是否因细胞粘附于计数杯上而导致计数值的持续下降。从每批计数杯中抽查检测。在 计数杯内加入稀释样本，放置不同的时间进行检测，以确认计数杯是否合格。临计数前，样品杯内的稀 释液必须充分混勾。 4.5仪器性能 1 PDF文件使用“pdfFactoryPro"试用版本创建www.fineprint.cn WS/T245—2005 4.5.1电子细胞计数仪的设计要达到每个细胞只能计数一次的要求。细胞通过计数敏感区时颗粒回 流的可能性要很小，由此产生的脉冲应低于相应的低阈值。 4.5.2电子计数装置应有能力通过脉冲高度来区分检测的细胞、其他细胞和电噪声，且能保证检测误 差足够小。 4.5.3仪器小孔的直径为80~100um，小孔长度为直径的70%~100%。 4.5.4计数过程中吸人的标本体积的准确度要求在1%以内，准确度应溯源至国家或国际计量标准。 4.5.5通过水银柱或其他适当物质的移动吸人标本。吸人标本的体积受温度影响的程度应小于每摄 氏度0.1% 4.5.6为了避免人为因素的影响，设定阅值时要求保证信噪比在100：1以上。 4.6试剂 4.6.1稀释液 DUSE 4.6.1.1稀释液应为无菌、无毒 4.6.1.2要求标示稀释液的 参透压的大 小在 280士15m0sm范围内。 公 4.6.1.3在设定的阅值条 释液的空自计数应少于 1X10% 1/L. 4.6.2溶血剂 在全血标本中计数目 红胎时，红细胞须首先被溶解 溶血剂的作用不能影响白细胞计数，同时红细 胞的碎片应被减至不部 白细胞计入。 4.6.3冲洗液 冲洗液由稀释液 P 5.1冲洗 计数前用冲洗液冲洗 义器。 5.2重叠计数校正 要求 稀释 计数的每一份标本 进行重叠校正 进行重叠校正的标 释方法和检测次数：制备2份稀释原液（每份0.1ml血加20ml稀释液）。取 0.02.0.040.06和0.08择原液分别加人20ml稀释液中以制备两套4个浓度的次级稀释标本，浓 度最高的次级稀释标本 20ml，稀释倍数为1/5045l：每份 次级稀释标本的计数次数如下所示： 次级稀释标本 0.042 0.06+20 0.08+20 计数次数 3 5.3将稀释标本移入计数杯 稀释标本应移至计数杯内，轻经 包计数应在稀释后5分钟内 完成。 服务平台 5.4计数过程 5.4.1样本通过小孔的时间可依照制造商的推荐而定。 5.4.2按5.2规定的检测次数，对每份次级稀释标本进行重复检测。 5.5阅值的验证 将低计数阀值设在血小板和红细胞脉冲信号之间波谷的位置。 5.6重叠计数的校准方法 重叠计数的校正是使用回归分析方法来检查回归的线性：分析的数据点由检测两套4个浓度的次 级稀释标本得出。Y轴代表每个水平的次级稀释标本的累积计数值，X轴上的刻度将最高浓度次级稀 释标本（0.08+20ml）的浓度定为1.0。 次级稀释标本（ml） 0.02+20 0.04+20 0.06+20 0.08+20 2 PDF文件使用"pdfFactoryPro"试用版本创建www.fineprint.cn