WS/T 212--2001 創言 前 血清氟水平是评价人群氟负荷的重要指标，它在表明机体受氟危害及氟中毒中具有较重要的意义。 因此，在地方性氟中毒的防治研究及防龋的研究中经常进行该指标的检测。 本标准规定的血清中无机氟测定方法，是在参考了国内外多年来报道的各种血清氟测定方法的基 础上并结合我国的国情制定的适于一般实验室可操作的方法。本标准规定的操作步骤及技术指标均经 过实验室和现场验证。 本标准由卫生部疾病控制司提出。 本标准起草单位：中国地方病防治研究中心地氟病研究所。 本标准主要起草人：万桂敏、于光前、徐春蓓、王守智、张志瑜、张丽虹、叶平、边建朝、赵新华、宋丽、 石玉霞、刘忠杰。 本标准由卫生部委托中国地方病防治研究中心负责解释。 152 中华人民共和国卫生行业标准 血清中氟化物的测定离子选择电极法 WS/T 212--2001 Determination for fluoride in serum--Ion selective electrode method 1范围 本标准规定了用离子选择电极法测定血清中无机氟化物的浓度。 本标准适用于各种人群及动物血清中无机氟化物浓度的测定。 2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均 为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法 3原理 氟离子选择电极的氟化镧单晶膜对氟离子有选择性，由电极膜分开的两种不同浓度的氟溶液之间 存在电位差即膜电位，其大小与溶液中氟离子活度有关。利用电动势与氟离子活度的线性关系，可直接 求出血清中氟离子浓度。 4 试剂 本标准使用的试剂纯度除特别说明外均为分析纯。实验用水应符合GB/T6682中规定的二级水。 全部试剂贮于聚乙烯瓶中。 4.1氟化物标准溶液 4.1.1氟化物标准贮备液：准确称取经120℃干燥2h并冷却至室温的氟化钠（优级纯）0.2210g，用 水溶解后移人100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，倒人聚乙烯瓶中备用。此液1ml含氟 1 000 μgF-。 4.1.2氟化物标准工作液I［c（F-）100.0μg/mL：吸取氟化物标准贮备液（4.1.1)10.00mL，移人 100mL容量瓶中，用水定容至刻度。 4.1.3氟化物标准工作液I［c（F-）=10.0μg/mL」：吸取氟化物标准工作液1（4.1.2)10.00mL，移 人100 mL容量瓶中，用水定容至刻度。 4.1.4氟化物标准工作液Ⅲ［cF-）5.0μg/mL］:吸取氟化物标准工作液I（4.1.2)5.00mL，移人 100mL容量瓶中，用水定容至刻度。 4.1.5氟化物标准工作液V［c(F²）=2.0 μg/mL:吸取氟化物标准工作液I（4.1.2)2.00 mL，移人 100mL容量瓶中，用水定容至刻度。 4.1.6氟化物标准工作液V［c(F-）=1.0 μg/mL］:吸取氟化物标准工作液Ⅱ（4.1.3)10.00mL，移人 100mL容量瓶中，用水定容至刻度。 中华人民共和国卫生部2001-11~14批准 2002-05-01 实施 153 WS/T 212—2001 氟化物标准工作液（4.1.4～4.1.6)临用时现配。 4.2总离子强度调节缓冲液(TISAB) 4.2.1总离子强度调节缓冲液（TISAB)：称取58.0g氯化钠、0.4g 柠檬酸三钠（Na:C.H,O，·2H2O）， 溶于约500 mL水中,加人 57mL 冰乙酸，用氢氧化钠[c(NaOH)=5mol/L］调pH 为5～5.2,用水定容 至1L。 4.2.2含氟总离子强度调节缓冲液：配制同4.2.1，在加水稀释前，加氟化物标准工作液1（4.1.3） 2.00 mL。此液含氟0.02 μg/mL。临用前现配。 5仪器 5.1离子活度计或精密酸度计：分辨瓣率为0.1mV。 5.2氟离子选择电极：CSB-F-Ⅲ型（长沙特种硬质合金工业公司产）。 5.3232型甘汞电极。 5.4磁力搅拌器。 5.5塑料微容池，具有聚乙烯包裹的搅拌子。 5.6可调微量移液器或微量加样器2～20μL（±0.02μL）。 6采样 采集空腹肘静脉血 1.5～2mL，置于无氟具塞的聚乙烯管中，采集后立即离心（3000r/min， 10 min)取血清测氟。若不能及时分析，保存冰箱（4℃)中，一周内完成测定。也可保存于一18℃～一20℃ 冰盒内2周测定。 7 分析步骤 7.1标准加人法 7.1.1电极实际斜率的测定 7.1.1.1氟化物标准系列的配制：取6个25mL容量瓶，按表1配制标准系列。 表1 氟化物标准系列的配制 容量瓶号 2 1 3 4 5 6 1.0μg/mL氟化物标准工作液V/mL 1. 25 2.50 5. 00 0.50 10.0μg/ml氟化物标准工作液1/mL 1. 25 2. 5 12.5 12. 5 12.5 12.5 TISAB液/mL 12.5 12.5 用水定容至刻度 氟含量/μg/mL 0. 02 0. 05 0. 1 0. 2 0.5 1. 0 7.1.1.2氟化物标准系列的测定：分别吸取上述各浓度的氟标准液0.80mL于微容池内，放一根搅拌 棒，移至磁力搅拌器上，插人氟电极和甘汞电极，测定溶液的电位值，从低浓度到高浓度逐个进行。待读 数稳定后（即每分钟电极电位变化小于1mV），读取电位值，同时记录测定时的温度。 即可得不同浓度范围内的电极实际斜率。也可用上述标准系列测得的电位值（E：)和相应的标准液的浓 度(Cs)按式(1)可求得任意两个标准溶液浓度范围的电极实测响应斜率。 S = (Es, -- E$)/lg(Cs, /Cs,) ·(1) 电极实际斜率； 式中：S Es,—高浓度标准溶液的电位值； Es,---低浓度标准溶液的电位值； 154 WS/T 212—2001 C's。—高浓度标准溶液的浓度; Cs, —低浓度标准溶液的浓度。 7.1.2样品测定：吸取0.40mL血清置于微容池中，再加人0.40mL总离子强度调节缓冲液（4.2.1） 【如样品含氟量低于0.02ug/mL，测定时则加人0.40mL含氟 TISAB液（4.2.2)】。放一个搅拌子,将 微容池放在磁力搅拌器上搅拌几秒钟、混匀样液，然后插入氟电极和甘汞电极测定电位值E，，再另加小 体积（10.0～20.0μL)氟化物标准工作液I、Ⅲ或V（4.1.3、4.1.4或4.1.5)测定电位值E2，按式（2）、 (3)计算血清中氟含量。 7.2标准曲线法 7.2.1标准曲线的绘制 7.2.1.1氟化物标准系列的配制：同7.1.1.1。 7.2.1.2氟化物标准系列的测定：同7.1.1.2。用对数坐标纸，以等距离表示电位值，对数坐标表示氟 离子浓度，绘制标准曲线。标准曲线应在测定样品的同时绘制。 7.2.2样品测定：准确吸取0.40 mL血清于微溶池内，再加人0.40mL总离子强度调节缓冲液 （4.2.1）［如样品含氟量低于0.02ug/mL，测定时则加人0.40mI含氟总离子强度缓冲液（4.2.2)］，按 7.1.2的方法测定电位值，查曲线并按式（4）、（5)计算氟含量 8结果计算 8.1标准加人法的计算，见式（2）、（3）。 Cx = [(Cs · Vs)/Vx)/(10等 -- 1) .(2) Cx = [(Cs ·Vs/Vx)/(10等 - 1)］ - 0. 02 (3) （当样品加含氟TISAB液时，用此式计算氟浓度。） 式中：Cx-血清中氟含量,μg /mL; Cs—加人的氟化物标准溶液浓度，μg/mL，（应是被测液浓度的 50～100倍）; Vs—一加入的氟化物标准液体积，mIL，（不超过被测液体积的1/50～1/100）; Vx-量取的血清体积,mL; △E--E²与 E 之差（△E 以 20～30 mV为宜)。 电极的实测斜率[取与被测液相接近的浓度范围的标准液精确测定值，而不能以理论斜率 S- 或实测的标准系列的平均斜率(指全区间)的S值计算］。 8.2标准曲线法的计算，见式（4）。 Cx = CX 2 4） （当样品加含氟TISAB液时，用式（5)计算氟浓度。） Cx = (C - 0. 01) X 2 .(5) 血清氟含量，μg/mI; 式中：Cx C查曲线得氟含量，μg /mL。 9说明 9.1检测下限和测定范围 检测下限为 0.012 uμg/mL。 本方法可准确测定含氟量大于0.02μg/mL血清中无机氟含量。 9.2精密度和准确度：同一实验室对含氟量0.059uμg/mL、0.090μg/mL和0.203μg/mL的血清样品 8次测定的相对标准偏差分别为3.39%、1.89%、0.99%。当血清样品的本底氟值为0.054μg/ml、 0.089uμg/mL、0.205μg/mL进行加标回收实验，回收率分别为96.7%±3.01%、101.2%±2.50% 155