C 52 wS 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T 109-1999 血清中硒的氢化物发生-原子 吸收光谱测定方法 Serum-Determination of selenium--Hydride generation atomic absorption spectrometric method 1999-01-21 发布 1999-07-01实施 中华人民共和国卫生部发布 WS/T 109—1999 前 况经过实验室研究和现场验证后提出的。 本标准从1999年7月1日起实施。 本标准由卫生部卫生法制与监督司提出。 本标准起草单位：河南省新乡市职业病防治研究所、天津市劳动卫生职业病研究所。 本标准主要起草人：郝大情、张一敏、谢国红、田国均、刘黛莉。 本标准由卫生部委托中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所负责解释。 中华人民共和国卫生行业标准 血清中硒的氢化物发生-原子 吸收光谱测定方法 WS/T 109—1999 Serum-Determination of selenium--Hydride generation atomic absorption spectrometric method 1范围 本标准规定了氢化物发生-原子吸收光谱法测定血清中硒浓度的方法。 本标准适用于正常人和接触硒的作业人员血清中硒浓度的测定。 2原理 血清经硝酸-高氮酸消解后，在酸性介质中，用硼氢化钠将硒还原成硒化氢，由载气将生成的硒化氢 导入加热的石英原子吸收管中原子化，根据硒的基态原子对其特征谱线的吸收程度而定量。 3仪器 3.1玻璃和塑料器Ⅲ均用20%(V/V)硝酸溶液浸泡过夜，用蒸馏水、去离子水分别冲洗干净，避尘晾 干备用。 3.2具塞塑料管：2mL。 3.3离心机：4000r/min。 3.4称量瓶：25mm×40mm。 3.5具塞比色管：10ml。 3.6电热板：0.6~1.8kW。 3.7VA-90氢化物发生装置。 3.8硒空心阴极灯。 3.9原子吸收分光光度计；仪器操作条件见表1。 表1仪器操作条件 项 条 件 项 目 条 件 长 空气流基 196.0nm 8.0L/mi 狭 0.3 nm 1.9 L/min 乙炔流盘 灯电流 8 mA 燃烧器高度 18 mm 氩气流量 0.8 L/min 测量方式 蜂高 试剂 4 息服务工 实验用水为去离子水。 4.1 硝酸：P2n1.42g/ml,优级纯。 4.2高氟酸：P20=1.67g/ml，优级纯。 中华人民共和国卫生部1999-01-21批准 1999-07-01实施 WS/T 109—1999 4.3盐酸：P20=1.19g/mL，优级纯。 4.4硝酸溶液：3%(V/V)。 4.5 乙醇溶液:75%(V/V)。 4.6盐酸溶液：6%(V/V)。 4.7混合消解液:硝酸-高氯酸，1+1。 4.8硼氢化钠碱性溶液（6g/L）：称取0.6g硼氢化钠（优级纯）和0.5g氢氧化钠（分析纯），用水溶解 并稀释至100mL。 4.9空白血样：取小牛血清或若干个正常人混合血清充分混匀待用。 4.10硒标准溶液：标准值为100μg/mL。临用前用盐酸溶液稀释成0，40.0，80.0，160.0，240.0， 320.0μg/L的标准应用液。 5果样、运输和保存 用硝酸溶液和乙醇溶液依次清洗皮肤后，抽取静脉血2mL于具塞塑料管中。放置1h后，于 2000r/min离心10min，小心取出全部血清，并置于具塞塑料管中；于4℃条件下至少可以保存五周。 6分析步骤 6.1样品处理 将血清充分混匀后，取0.5mL于小称量瓶中，加1mL混合消解液轻轻混匀；将称量瓶倾斜加盖置 于180℃士10℃电热板上加热消解，待消解样为无色透明且冒白烟时立即取下放冷。用1mL去离子水 小心冲洗瓶盖于称量瓶中，再加0.6mL浓盐酸，充分混匀后，口于电热板上继续加热10min，将六价 硒还原为四价硒，取下放冷。将残液转移至具塞比色管中，用加温的水少量多次洗涤称量瓶，洗涤液并入 比色管中，而后用水定容至刻度，混匀供测定。同时取0.5mL水如上操作制备试剂空白。 6.2标准曲线的绘制 取6个具塞比色管，按表2配制标准管。 表2硒标准管的配制 管 5 2 0 1 3 4 0. 5 0.5 0. 5 0. 5 0. 5 0.5 不同浓度的硒标准应用液,mL 0. 5 0. 5 0. 5 0. 5 0. 5 0. 5 空白血样,mL 240.0 160.0 320.0 0 80.0 40.0 硒的浓度，μg/L 将仪器调节到最佳状态，分别将4.0mL标准系列溶液加入氢化物发生器的反应瓶中，盖上瓶塞， 通载气几秒钟赶尽反应瓶中的空气后停气。定量注入2.0mL硼氢化钠碱性溶液，滞留2s通气，依次测 定各管的吸光度，每个浓度测定3次，将标准管的吸光度减去空白血样的吸光度，求平均值，以吸光度均 值为纵坐标，硒的浓度（μg/L)为横坐标，绘制标准曲线。 6.3测定 在标准曲线测定的同样条件下，测定样品和试剂空白的吸光度，以测得的样品的吸光度减去试剂空 白的吸光度后，由标准曲线上查得血清硒的浓度。 7说明 7.1本法的最低检出浓度为1.55μg/L，特征浓度为2.93μg/L；线性范围为0～320.0μg/L；相对标 准偏差为3.3%~～5.4%（血清硒浓度为60.0~200.0μg/L，n=6)，加标回收率为99.2%~103.4%（血 清硒本底浓度为52.65~~129.53μg/L，加标浓度为40.0~160.0μg/L，n=6），用本法测定GBW09131 牛血清标准物质中硒的浓度，相对偏差为一3.4%。 2