尿中4-氨基-2，6-二硝基甲苯的气相色谱测定方法 WS/T 59-1996 1主题内容与适用范围 本标准规定了尿中4-氨基-2，6-二硝基甲苯的气相色谱测定方法。本法最 低检测浓度为4ug/L。 本标准适用于接触三硝基甲苯（TNT)的工人尿中4-氨基-2，6-二硝基甲苯的 测定。 2原理 尿样加盐酸加热水解后，在pH7～8用甲苯萃取尿样中4-A，进气相色谱仪 测定。采用OV-17柱分离，电子捕获检测器检测，以保留时间定性，峰面积定量。 3仪器 3.1气相色谱仪，电子捕获检测器。 业标准信息服务平台 3.2旋涡混合器。 3.3容量瓶，10mL。 3.4具塞试管，5mL。 3.5微量注射器，5μL。 3.6聚乙烯塑料瓶，50100mL。 3.7尿比重计。 4试剂 本标准所用试剂除另有说明者外，均为分析纯级。 4.1实验用水：为重蒸馏水或具有同等纯度的去离子水。 4.2盐酸，P20=1.19g/mL。 4.3碳酸氢钠。 4.4无水乙醇。 4.5甲苯。 4.62，6-二硝基甲苯，化学纯。内标物。 4.72，6-二硝基甲苯溶液：称取50mg2，6-二硝基甲苯溶于甲苯中，并稀释至 100mL，混匀。逐级稀释成含内标0.5μg/mL的甲苯溶液。 4.84-氨基-2，6-二硝基甲苯（4-A)标准品。 4.94-氨基-2，6-二硝基甲苯标准溶液：取标准品以无水乙醇为溶剂，配成浓度 为1mL相当于2mg4-A的贮备液。临用前，以甲苯或含内标0.5ug/mL的甲苯 4.10质控样：用加标的模拟尿、接触者混合尿或加标的正常人混合尿作质控样。 标准信 5采样、运输和保存 用聚乙烯塑料瓶收集约100mL接触TNT十人的班后尿，尽快测量比重，每 100mL尿加10mL盐酸（4.2）。夏季运输时最好冷藏。分析前放普通冰箱内，可 保存两周。 6分析步骤 6.1仪器操作条件 色谱柱：柱长1.6m，内径3.2mm，玻璃柱。 0V-17: Shimalite W(AW-DMCS)201D(80~100 )=1.5:100。 柱温：220℃。 程序升温：初温为200℃，保持0.4min以后以10℃/min的速率升温至220 ℃，然后再以5℃/min的速率升至240℃，保持1min，分析结束。 载气（氮气）：50mL/min。 6.2空白试验 取正常人混合尿按照样品处理（6.3)的操作同样处理，与样品同时进行测定。 6.3样品处理 取1mL尿样于5mL具塞试管中，加入0.1mL浓盐酸，混合均匀（已加盐酸 保存的尿样取1.1mL），于100℃水浴中放置1h。冷却后，用过量固体碳酸氢钠 4.3)调至pH7～8，然后用1mL甲苯（4.5）［或含内标的甲苯溶液（4.7)］萃取， 在旋涡混合器上振摇3min，放置分层，上层甲苯溶液供分析用。 6.4标准曲线的绘制 取7个容量瓶，按下表配制标准管。 标 4-A标准管的配制 管 号 4-A标准溶液（4.9)，mL 0 0.25 0.50 1.00 2.50 5.00 10. 00 甲苯[或含内标（4.7)]，mL 10.00 9.75 9.50 9.00 7.50 5.00 0.00 4-A浓度，μg/mL 0 0. 5 2 10 20 5 各取2uL以上标准管中的溶液进气相色谱仪，按仪器操作条件（6.1)测定， 重复进样三次。以4-A浓度为横坐标，各浓度峰面积（或与内标峰面积之比)平均 值为纵坐标，绘制标准曲线。 6.5样品测定 取2uL按6.3条处理得到的甲苯萃取液进样，按仪器操作条件（6.1)测定。 用保留时间定性，峰面积（或与内标峰面积之比）定量。在测定前后以及每测定 10个样品后，测定一次质控样。 7 计算 7.1按式(1)计算尿样换算成标准比重（1.020)下的浓度校正系数k。 1.020 -1.000 实测比重-1.000 · (1) 7.2按式(2)计算尿中4-氨基-2，6-二硝基甲苯的浓度。 Xc· k (2) 式中：X一尿中4-氨基-2，6-二硝基甲苯的浓度，mg/L; c—由标准曲线查得的4-氨基-2，6-二硝基甲苯浓度，ug/mL。 8说明 8.1本法的检测限为7.2X10-12g。4-A浓度在0～50mg/L范围内进样2uL，浓 度与峰面积（或峰面积之比）呈线性关系。在应用中，标准曲线的上限为20mg/L， 已能满足分析要求。当尿中4-A浓度为0.90，2.71，5.42mg/L时，批内变异系 数分别为2.0%，2.2%和1.3%，批间变异系数分别为4.1%，3.7%和3.4%（n=6）。 尿中4-A浓度为0.94~5.41mg/L时，加标回收率为85%~100%。 8.2采集班后尿样时，工人要脱离生产场所，换下工作服，洗净手、臂及面部， 以防TNT的污染。采样后应尽早加酸在冰箱中保存。 8.31mL尿样加0.1mL盐酸在100℃加热1h时，4-A水解量最大。