WS 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T 42—1996 血中碳氧血红蛋白的分光光度 测時定時方法 Blood--Determination of carboxyhemoglobin -Spectrophotometric method 行业标准信息服务 1997-05-01实施 1996-10-14发布 中华人民共和国卫生部•发布 中华人民共和国卫生行业标准 血中碳氧血红蛋白的分光光度 WS/T 42-1996 方時法 定 测 Blood-Determination of carboxyhemoglobin -Spectrophotometric method 1 主题内容与适用范围 本标准规定了血中的碳氧血红蛋白的分光光度测定方法。 本法最低检测浓度为2%HbCO。 本标准适用于正常人和接触一氧化碳工人血中HbCO浓度的测定。 2原理 血液中含有四种血红蛋白成分，即还原血红蛋白（Hb）、氧合血红蛋白（HbO,)、碳氧血红蛋白 (HbCO)及微量的变性血红蛋白(MetHb),用连二亚硫酸钠将 HbO2和 MetHb还原成 Hb,则血液中只 存在HbCO（I)和Hb（Ⅱ）两种成分。I的最大吸收波长在420nm，I的最大吸收波长在430nm。测出 被检血样在两个波长的吸光度，再利用1与Ⅱ在两个波长下的摩尔吸光系数计算HbCO的百分浓度。 3仪器 3.1分光光度计，10mm比色杯。 3.2液体快速混合器。 3.3采血吸管。 3.4小玻璃管，25mm×4mm，带帽。 3.5试管，10mL，具磨口塞，实际能盛15mL至满。 4 试剂 本标准所用试剂除另有说明者外，均为分析纯试剂。 实验用水：去离子水或经全玻璃蒸馏器重蒸的水。 4.13 4. 2 硫酸.P2o=1. 84 g/mLa 4.3 甲酸,85%(m/m)。 4.4连二亚硫酸钠(NazS,04)。 4.5氮气，高纯。 4.6氧气，高纯。 自滴液漏斗滴加浓硫酸，产生的一氧化碳通过内装氢氧化钠水溶液（4.8)的洗气瓶及缓冲瓶后通入样品 液中。操作应在良好的通风橱内进行。 4.8氢氧化钠溶液，20g/L 1997-05-01实施 中华人民共和国卫生部1996-10-14批准 1 WS/T 42-1996 4.9血液稀释液0.02mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液。 4.10肝素溶液，5g/L。 5采样、运输和保存 取末梢血约10μL，直接注入到小玻璃瓶中（事先加人5g/L肝素溶液40uL），立即加帽，旋转混匀 以防凝血。于保温瓶中加冰运送，置冰箱冰盒内（一8C)保存。一周内分析完毕。 6分析步骤 6.1摩尔吸光系数的测定 摩尔吸光系数不易测定。但在本法计算中，可用同一浓度的血样制得Hb及HbCO，测其在420nm， 430nm下的吸光值来代替，作为常数。测定方法如下； 取不吸烟健康人血（肝素抗凝）用水稀释5倍。取0.3mL加Tris稀释液（4.9)至90mL通氧气 30min。从中取4份，每份15mL于具塞试管中。其中两份通氮气10min以除去过剩的氧，得到HbOz 液。另两份通纯-一氧化碳气10min，得到HbCO液。立即将HbOz、HbCO制备液分别转入内盛60mg连 二亚硫酸钠的具塞试管中，混匀，放置10min测量。读取430nm和420nm的吸光度值，代替摩尔吸光 系数（以下简称吸光常数）。 6.2样品处理和测定 将冷藏的血样于室温放置，用液体混合器混匀，迅速取10μL（二个平行样），加入内盛15mLTris 加人60mg连二亚硫酸钠，轻轻混勾放置10min，用10mm比色杯以试剂空白为参比，测其在420nm 和430nm处的吸光度值。 7 计算 按下式计算血中HbCO的浓度。 A430 + k2 - A420 · k 式中：X一血中碳氧血红蛋白的浓度，%； A420—血样在420nm的吸光度读数； A430——血样在430nm的吸光度读数； k,—HbCO在420 nm的吸光常数(6.1); k2—HbCO在430 nm的吸光常数(6.1); k-—Hb在420nm的吸光常数（6.1)； k——Hb在430nm的吸光常数（6.1)。 8说明 8.1本法检测限（0.02吸光度对应的浓度）为2%HbCO。测定范围：2%~70.5%HbCO。精密度：批间 变异系数为1.9%~5.6%（HbCO浓度为9.9%、36.6%、56.8%，n=6）。准确度：中毒病人血样加已知 HbCO浓度血测定回收率，平均为95.8%（三个浓度，n=8)。 8.2本法测定所依据的Hb与HbCO含量比例与血红蛋白含量高低无关，因此取血量不需要很准确。 吸光度常数测定后只要仪器波长稳定，可较长时间使用。 8.3空气中有大量氧气，所以血样及制成的待测液接触空气越少越好。实验证明含HbCO20%及近饱 和HbCO的待测液，其容器上端空气分别为5~6mL及20mL时，较装满或近满者，测定结果HbCO 平均下降4.5%及10.2%(n=6)。 2 WS/T 42--1996 8.4非高纯级的钢瓶氧气和氮气含有微量的一氧化碳。制备HbO，时应通过加热至80～~100C的1cm X10cm霍加拉特管除去之。 8.5连二亚硫酸钠遇水易分解。应避光密封保存，临用现称。如试剂放置过久可按附录A（补充件)方 法标定。 行业标准信息服务平