WS/T98--1996 前言 本标准适用于检测正常人群和职业接触人群尿中肌酐的浓度。本标准是参考了国外的检测方法，结 合我国情况经过实验室研究和现场验证后提出的。 本标准由卫生部卫生监督司提出。 本标准起草单位：山东省劳动卫生职业病防治研究所。 本标准主要起草人：邵华、戴秀莲、程虎、王郡甫。 行业标准信息服务平台 中华人民共和国卫生行业标准 尿中肌酐的反相高效液 相色谱测定方法 WS/T 98-1996 Urine-Determination of creatinine- Reversed-phase high performance liquid chromatographic method 1 范围 本标准规定了反相高效液相色谱测定尿中肌酐浓度的方法。 本标准适用于人尿中肌酐浓度的测定。 2原理 尿样采集后，以双蒸水稀释，直接进高效液相色谱，在反相C18柱上将肌酐同其他杂质分离，然后在 紫外检测器254nm波长下定量测定。 3仪器 3.1聚乙烯塑料瓶或硬质玻璃瓶（收集尿样用）。 3.2旋涡混合器。 3.3高效液相色谱仪：紫外检测器，入=254nm， 色谱柱：反相C18，4mm×300mm，5μm 柱温：室温； 流动相：0.05mol/L乙酸钠+甲醇=95+5(V/V）； 流速：0.9mL/min。 4试剂 4.2 甲醇。 4.3肌酐，优级纯。 4.4肌酐标准溶液：准确称取250mg肌酐，溶于甲醇，稀释至25mL，配制成10mg/mL肌酐贮备液， 再以甲醇稀释，配制成100μg/mL肌酐标准溶液。贮备液及标准溶液均在4℃冰籍保存，至少稳定半年。 5采样 用聚乙烯塑料瓶或硬质玻璃瓶收集人尿，4℃保存，二周内分析完毕。 6分析步骤 6.1样品处理 中华人民共和国卫生部1997-01-11批准 1997-09-01实施 WS/T 98-1996 取0.05mL尿样，用流动相稀释200～500倍，在旋涡混合器上混合1min，待分析。 6.2标准曲线的绘制。 用肌酐标准液配制0，2.0，4.0,6.08.0,10.0μg/mL肌酐标准系列（以流动相稀释），将仪器按测 定条件调节到最佳状态，分别取10μL各浓度标准系列进行分析，测定相应的峰高或峰面积，每个浓度 重复6次，求平均值。以峰高或峰面积均值为纵坐标，肌酐浓度（μg/mL）为横坐标，绘制标准曲线。 6.3测定 在标准曲线测定的同样条件下，测定样品的峰高或峰面积，由标准曲线查得肌酐的浓度（ug/mL）。 7 计算 按式（1）计算尿中肌酐的浓度。 C-U ·(1) A 式中：C-一尿中肌酐浓度，μg/mL; c一一由标准曲线查得的肌酐浓度，μg/mL u--尿样稀释体积，mL； V取尿样体积，mL。 8说明 8.1以基线噪音3倍计，本方法的最低检出浓度为0.1μg/mL，线性范围为0～10μg/mL，当肌酐浓度 为400~800μg/mL时，加标回收率为93.0%~97.0%，相对标准偏差为1.6%~5.7%。 8.2尿样在4℃下保存二周，相对偏差为十5%。 8.3应用本方法测定尿中肌酐时，尿酚、马尿酸、甲基马尿酸、苯甲酸、苯乙醇酸、苯乙醛酸、对硝基酚、 五氯酚、N-甲基甲酰氨、三氯乙酸、三氯乙醇、2-苯基丙醇等不产生干扰。 8.4为保护色谱柱，延长其使用寿命，每次工作结束后，必须用双蒸水冲洗色谱柱，再以甲醇冲洗。 8.5如有可变波长检测器时，可用肌酐的最大吸收波长230nm进行检测，从而提高本方法的灵敏度。 8.6色谱柱可使用任何厂牌的反相C1柱，流动相配比及流速可根据各自的仪器条件进行适当选择。 8.7尿样稀释倍数一般在200～500倍，以稀释后肌酐峰高或峰面积在标准曲线范围内为准。 息服务平台 WS/T 98-1996 取0.05mL尿样，用流动相稀释200～500倍，在旋涡混合器上混合1min，待分析。 6.2标准曲线的绘制。 用肌酐标准液配制0，2.0，4.0,6.08.0,10.0μg/mL肌酐标准系列（以流动相稀释），将仪器按测 定条件调节到最佳状态，分别取10μL各浓度标准系列进行分析，测定相应的峰高或峰面积，每个浓度 重复6次，求平均值。以峰高或峰面积均值为纵坐标，肌酐浓度（μg/mL）为横坐标，绘制标准曲线。 6.3测定 在标准曲线测定的同样条件下，测定样品的峰高或峰面积，由标准曲线查得肌酐的浓度（ug/mL）。 7 计算 按式（1）计算尿中肌酐的浓度。 C-U ·(1) A 式中：C-一尿中肌酐浓度，μg/mL; c一一由标准曲线查得的肌酐浓度，μg/mL u--尿样稀释体积，mL； V取尿样体积，mL。 8说明 8.1以基线噪音3倍计，本方法的最低检出浓度为0.1μg/mL，线性范围为0～10μg/mL，当肌酐浓度 为400~800μg/mL时，加标回收率为93.0%~97.0%，相对标准偏差为1.6%~5.7%。 8.2尿样在4℃下保存二周，相对偏差为十5%。 8.3应用本方法测定尿中肌酐时，尿酚、马尿酸、甲基马尿酸、苯甲酸、苯乙醇酸、苯乙醛酸、对硝基酚、 五氯酚、N-甲基甲酰氨、三氯乙酸、三氯乙醇、2-苯基丙醇等不产生干扰。 8.4为保护色谱柱，延长其使用寿命，每次工作结束后，必须用双蒸水冲洗色谱柱，再以甲醇冲洗。 8.5如有可变波长检测器时，可用肌酐的最大吸收波长230nm进行检测，从而提高本方法的灵敏度。 8.6色谱柱可使用任何厂牌的反相C1柱，流动相配比及流速可根据各自的仪器条件进行适当选择。 8.7尿样稀释倍数一般在200～500倍，以稀释后肌酐峰高或峰面积在标准曲线范围内为准。 息服务平台