WS 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T23-1996 尿中6-氨基乙酰丙酸的分光光度 测定方法 Urine-Determination of -aminolevulinic acidSpectrophotometric method 行业标准信息服务平台 1996-10-14发布 1997-05-01实施 中华人民共和国卫生部发布 中华人民共和国卫生行业标准 尿中8-氢基乙酰丙酸的分光光度 WS/T23-1996 测定方法 Urine-Determination of -aminolevulinic acid-Spectrophotometric method 1主题内容与适用范围 本标准规定了尿中的8-氨基乙酰丙酸（8-ALA）的分光光度测定方法。最低检测浓度为0.3mg/L。 本标准适用于正常人和接触铅工人尿中8-AI.A浓度的测定。 2原理 尿中-ALA与乙酰乙酸乙酯缩合生成吡咯化合物。此化合物用乙酸乙酯提取，与对-二甲氨基苯甲 醛作用生成红色化合物，在波长554nm处比色定量。 3仪器 3.1分光光度计，10mm比色杯。 3.2具塞比色管，10mL。 3.3离心机。 3.4电炉。 3.5聚乙烯塑料瓶，100ml 3.6尿比重计。 4试剂 本标准所用试剂除另有说明者外，均为分析纯试剂。 4.1实验用水：为蒸馏水或具有同等纯度的去离子水 信息服务平 4.2冰乙酸P2u=1.05g/mL。 4.3高氯酸，P2=1.67g/mL。 4.4无水乙酸钠。 4.5对-二甲氨基苯甲醛。 4.6乙酰乙酸乙酯。 4.7乙酸乙酯。 4.8乙酸盐缓冲液（pH=4.6）：于700mL水中加入57mL冰乙酸（4.2），82g无水乙酸钠（4.4）.溶解 后加水至1000mL。 4.9显色剂：于30mL冰乙酸（4.2）中加入1g对-二甲氨基苯甲醛（4.5），5mL高氯酸（4.3），5mL 水，溶解后用冰乙酸（4.2）稀释至50mL，混匀，存于冰箱中。 4.108-ALA标准溶液：准确称取0.01280g8-ALA·HCl。用水溶解后，移入100mL容量瓶中，稀释 中华人民共和国卫生部1996-10-14批准 1997-05-01实施 1 WS/T23-1996 至刻度，此溶液1mL=0.10mg8-ALA。再用水稀释成1mL=10μg8-AL.A的标准应用溶液。 4.11质控样：标准尿样、加标的模拟尿、加标的正常人混合尿或接触者的混合尿。 5采样、运输和保存 用塑料瓶收集铅作业工人尿样50mL，尽快带回实验室（夏季运输时最好冷藏），测比重后，放4C 冰箱可保存二周。 6分析步骤 6.1样品处理 6.1.1分别取1mL尿样于2支10mL具塞比色管中，各加1mL水，2ml乙酸盐缓冲液（4.8)，混匀， 其一为样品管，另一为尿样空白管。 6.1.2向样品管中加入0.4ml乙酰乙酸乙酯（4.6），向空白中加入0.4mL乙酸盐缓冲液（4.8），充分 混匀。 6.2标准曲线的绘制 6.2.1取6支10ml具塞比色管，按下表配制标准管。 8-ALA标准管的配制 管 号 3 5 8-ALA标准应用溶液（4.10），mL 0 0.1 0.3 0.5 0. 1.0 水，mL 2.0 1.9 1.7 1.0 1.5 8-ALA含量，g .0 3.0 5.0 10.0 6.2.2向各管 2mL乙酸盐缓冲液（4.820.4mL乙酰乙酸乙酯（4.6）.混匀 中加入 6.2.3于沸水浴中加热12min，取出冷却至室温。 6.2.4各加入4mL乙酸乙 6.2.5各取2mL酸乙货提取液于另6支10mL具塞比色管中，各加2mL显色剂（4.9），混匀，静置 10min，在554nm处，用10mm比色杯，以零管为参比测量吸光度。 6.2.6以吸光度为纵坐标-ALA令量为横坐标，绘制标准曲线 6.3样品测定 取6.1.2条制备的样品溶液，按6.2.3~6.2.5条操作。测得吸光度后，将样品管的吸光度减去尿空 白管的吸光度，从标准曲线上查出样品管中-ALA的合量。在测定前后及每次测定10个样品后，测定 一次质控样。 服务平 7计算 7.1按式（1)计算尿样换算成标准比重（1.020)下的浓度的校正系数（k）。 1.020-1.000 k= ...(1) 实测比重-1.000 7.2按式（2)计算尿中-ALA的浓度。 m.k X= ·(2 ) V 式中：X——尿中-ALA的浓度，mg/L； m——样品管中-ALA含量，μg; V一分析时所取尿样的体积，mL。 2 WS/T23-1996 8说明 8.1本法的检测限为0.30mg/L（取0.5ml尿样）。测定范围：0.30~10.00mg/L。精密度：CV= 1.2%~3.6%。准确度：铅接触者的尿样加标回收率平均89.0%~95.7%（加标量：1.0，2.0，3.0， 5.0mg/l.，n=6)。 8.2接触者的尿样采集时间不限，采样时不存在污染问题。尿样4C保存14d相对偏差为十5.6%。 8.3煮沸时间应从比色管放进水浴后，水重新沸腾，开始计算时间，不得少于12min。 8.4尿中-ALA含量高或颜色较深时，可减少取样量。 8.5本法中红色生成物在60min内稳定。 8.6 乙酰乙酸乙酯如变黄色即不能使用 附加说明： 本标准由卫生部卫生监督司提出 本标准由山东省劳动卫生职业病防治研究所负责起草 本标准主要起草人戴秀莲 本标准由卫生部委托技术归口单位中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所负责解释。 息服务平台