ICS 71.040.40 SN B 40 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5119—2019 进出口食用动物中新霉素药物残留测定 酶联免疫吸附法和液相色谱-质谱/质谱法 Determination of neomycin residues in edible animal for import and export- ELISA and LC-MS/MS 2019-09-03发布 2020-03-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5119—2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准主要起草单位：中华人民共和国青岛海关 本标准主要起草人：孙明君、邱芳、张金玲、郑小龙、张晓文、梁成珠、孙涛、岳志芹、朱来华、王群。 业标准信息服务平台 SN/T5119—2019 进出口食用动物中新霉素药物残留测定 酶联免疫吸附法和液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了进出口食用动物的血浆、尿液中新霉素残留的酶联免疫吸附测定方法和液相色谱质 谱联用测定方法。 本标准适用于进出口食用动物猪、牛、羊血液及尿液中新霉素残留量的快速检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682一2008分析实验室用水规格和试验方法 第一方法 酶联免疫吸附法 3原理 出版文 基于竞争性酶联免疫反应，含有新霉素的抗原包被于微孔板上。药物分析时，样品同特异性一抗共 同被添加到板孔中。如果样品中含有药物，会竞争一抗，抑制抗体与板上包被的药物抗原结合。加人酶 标记二抗，形成包被抗原-抗体-酶标二抗复合物。加人底物后，产物的颜色强弱与样品中药物的浓度成 标准信息服务平台 反比。 4试剂与材料 4.1水：GB/T6682一2008中规定的二级水 4.2 碳二亚胺：分析级 4.3 卵清蛋白 4.4 牛血清白蛋白 4.5 透析袋 4.6 包被缓冲液 4.7 洗涤缓冲液 封闭缓冲液 4.9 稀释缓冲液 4.10 样品提取液 4.11 辣根过氧化物酶标记偶联物稀释液 4.12 底物液 4.13 显色剂液 1 SN/T 5119—2019 4.14终止液 4.15抗体 4.16HRP偶联物 4.17包被卵清蛋白偶联新霉素的聚苯乙烯微量96孔反应板 4.18标准品：硫酸新霉素，纯度90%。 4.19标准品贮备液：准确称取标准品，折合成目标化合物10.0mg，用适量水溶解，并用水定容至 10mL，混匀。一18℃以下避光保存，有效期为12个月。 4.20标准品中间液：用水稀释标准储备液至10mg/L，4℃以下避光保存，有效期为6个月。 4.21标准品工作液：用稀释缓冲液稀释标准中间液至工作浓度1.5μg/L、3ug/L、6μg/L、12μg/L、 36μg/L，现用现配。 注：4试剂与材料所涉及各种液体配制详见附录A 5仪器和设备 5.1分析天平，感量0.0001g。 5.2酶标仪，带有450nm滤光片。 5.3离心机：转数≥8000r/min。 5.4超声波发生器。 5.5微量移液器：单道20μL、50μL、100μL和多道5 5.6酸度计：pH测量范围0-14。 5.7涡旋式混合器。 5.8振荡器。 测定步骤 6.1试样制备与保存 6.1.1试样制备 分别采集动物血液10mL于含有肝素钠的抗凝试管中、新鲜尿液50mL装人洁净容器内，各分成 服务平台 两等份，作为试样密封并标明标记。在制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的 变化。 6.1.2试样保存 试样置于4℃下可保存3-4天；若长期保存，需将试样置于一18℃以下。 6.2提取 取50μuL样品，加1.2mL样品提取液，混匀，4000×g离心5min，上清液用于检测。 6.3酶联免疫测定 6.3.1根据待测样品数量和标准样品（每个样品2个平行），决定微孔的使用量。 6.3.24 每孔加入100μL含有卵清蛋白偶联新霉素抗原包被板4℃过夜。 在滤纸上用力垂直磕掉残留在壁上的液体。 2