ICS 71.040 SN B 46 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5116—2019 进出口食用动物、饲料孔雀石绿、 结晶紫测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of malachite green and crystal violet residues in edible ainmals and feeds for import and export- LC-MS/MS mthod 标准信息服务平台 2019-09-03发布 2020-03-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T5116—2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准主要起草人：赵善贞、张晓燕、崔凤云、霍忆慧、姜珊、李静静、程甲、宋蓉蓉、伊雄海、邓晓军、 郭德华。 业标准信息服务平台 SN/T5116—2019 进出口食用动物、饲料孔雀石绿、 结晶紫测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了进出口食用动物和饲料中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物隐色孔雀石绿、隐色结晶紫的 液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本标准适用于鱼、虾、蟹、贝、鱼粉、植物源性饲料、浓缩饲料、配合饲料、饲料添加剂、精料补充料中 孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于文本件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。 3方法提要 试样中的孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫残留用乙睛提取，中性氧化铝和阳离子交换 固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱仪检测，内标法定量。 4试剂材料 馆息服务平台 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T6682要求。 4.1乙睛：色谱级。 4.2 甲醇：色谱级。 4.3 二氯甲烷：色谱级。 4.4 甲酸：色谱级。 4.5 5乙酸铵：色谱级。 4.6 盐酸羟胺。 对甲苯磺酸。 4.8 氨水：25~28%。 4.9中性氧化铝柱：1g/3mL，使用前用5mL乙睛活化。 4.10 ）阳离子交换柱：60mg/3mL，使用前用3mL甲醇，3mL2%甲酸溶液活化。 4.11 0.25g/mL盐酸羟胺溶液：称取25g盐酸羟胺，用水溶解并定容至100mL。 4.12 21mol/L对甲苯磺酸溶液：称取17.2g对甲苯磺酸，用水溶解并定容至100mL。 4.13 5mmol/L乙酸铵溶液：精确称取0.435g乙酸铵（精确至0.01g），用水溶解并定容至1L。 4.142%甲酸溶液：准确移取2mL甲酸，用水定容到100mL。 1 SN/T5116—2019 4.15含5%氨水的甲醇溶液：准确移取5mL氨水，用甲醇定容到100mL。 4.165mmol/L乙酸铵溶液，含0.1%甲酸：精确称取0.435g乙酸铵（精确至0.01g），加人1mL甲酸， 用水溶解并定容至1L。 4.17含0.1%甲酸的乙睛；准确移取1mL甲酸用乙腈定容到1L。 4.18标准品：孔雀石绿（MalachiteGreenCAS号：2437-29-8）D,-孔雀石绿（D，-MalachiteGreen）、隐 结晶紫（CrystalVioletCAS号：548-62-9）、Ds-结晶紫（Ds-CrystalViolet）、隐色结晶紫（Leucocrystal VioletCAS号：603-48-5）、D-隐色结晶紫（D.-LeucocrystalViolet），纯度均大于98%。 4.19标准工作溶液的配制：分别称取0.01g（精确到0.00001g）孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐 色结晶紫标准品，分别用乙睛溶解并定容至10mL，各种标准储备溶液浓度为1mg/mL；标准储备溶液 于一18℃冰箱内避光保存，有效期为6个月。分别移取适量上述标准储备溶，用乙睛溶液逐级稀释，配 成100ng/mL的标准工作溶液，于4℃冰箱内避光保存，有效期为1个月。 4.20内标标准工作溶液的配制：分别称取0.01g（精确到0.00001g)Ds-孔雀石绿、D-隐色孔雀石绿、 D-结晶紫、D-隐色结晶紫标准品，分别用乙睛溶解并定容至10mL，各种内标标准储备溶液浓度为 1mg/mL；标准储备溶液于一18℃冰箱内避光保存，有效期为6个月。分别移取适量上述内标标准储 备溶，用乙睛溶液逐级稀释，配成100ng/mL的内标标准工作溶液，于4℃冰箱内避光保存，有效期为 1个月。 4.21标准曲线的绘制：根据需要吸取一定量的标准工作溶液以及内标标准工作溶液，用空白溶液配制 成标准曲线，临用前现配。 4.22滤膜：0.22μm有机相滤膜。 5仪器和设备 5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2分析天平：精确至0.00001g和0.01g 5.3均质器。 5.4离心机：转速可达10000r/min。 5.5超声波发生装置。 5.6旋转蒸发仪。 5.7固相萃取装置。 6试样制备与保存 取样品中有代表性的部分约500g，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记 将试样置于-18℃避光保存。 注：在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。 7前处理步骤 7.1鱼、虾、蟹、贝样品的提取、净化 7.1.1提取 2