ICS 71.040.40 SN B 40 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5121—2019 进出口食用动物、饲料中伊维菌素残留测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of Ivermectin residue in live animal and feed for import and export-LC-MS/MS method 2019-09-03发布 2020-03-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T 5121—2019 前言 本标准是照按GB/T1.1一2009起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国重庆海关， 本标准主要起草人：李光满、夏明星、陈宗祥、唐璜、王安良、郑小玲、熊英、周树予、李应国。 业标准信息服务平台 SN/T5121—2019 进出口食用动物、饲料中伊维菌素残留测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了进出口食用动物、饲料中伊维菌素残留测定液相色谱-质谱/质谱法。 本标准适用于进出口食用动物（如猪、牛、羊、兔、鸡、鸭）血液以及动物饲料中伊维菌素的测定和 确证。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 文本为 试样经乙睛涡旋振荡提取后，液相色谱-质谱/质谱法检测和确证，内标峰面积法定量。 4试剂材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 标准信 4.1乙睛：高效液相色谱级。 4.2甲酸。 4.3乙酸铵。 4.4氯化钠。 4.55mmol/L乙酸铵+十0.1%甲酸水溶液：称取0.385g乙酸铵于烧杯中，用水溶解，转移至1000mL 容量瓶中，用水洗涤烧杯至少3次，直至洗净，并将洗液全部转移至1000容量瓶中，再加入1mL甲酸 于1000mL容量瓶中，用水定容。 4.6标准物质：伊维菌素（Ivermetine，CAS号：70288-86-7），纯度均大于96%，伊维菌素同位素内标 （Ivermetin-d2），纯度大于98%。 4.7标准储备液：准确称取伊维菌素标准品0.1g（精确到0.0001g），用乙睛（4.1）充分溶解，稀释定容 于100mL容量瓶中，配制成浓度为1mg/mL的标准储备液：另将伊维菌素同位素内标标准品10mg， 用乙睛（4.1）充分溶解，稀释定容于10mL容量瓶中，配制成浓度为1mg/mL的伊维菌素同位素内标 标准储备液，最后分别将定容后的标准储备液倒人棕色试剂瓶中，一18℃以下避光保存。 4.8标准中间储备液：准确移取100μL伊维菌素标准储备液（4.7）和100μL伊维菌素内标标准储备液 （4.7）于两个100mL容量瓶中，用乙睛稀释定容，分别配成1/mL的伊维菌素标准中间储备液和 1ug/mL伊维菌素同位素内标标准中间储备液，溶液置于棕色试剂瓶中，一18℃以下避光保存。 4.9含内标的标准工作液：根据需要用乙（4.1）将伊维菌素标准中间储备液（4.8）稀释成合适的浓度 的混合标准工作曲线溶液，同时每个标液里面添加等量伊维菌素同位素内标标准中间储备液标准中间 1 SN/T 5121—2019 储备液（4.8），每个标液中伊维菌素同位素内标浓度为20g/L，伊维菌素浓度参考线性浓度范围为 5μg/L~50μg/L，临用时现配。 4.10基质标准工作液：选择不含伊维菌素的样品5份，按照本标准7.1进行处理至“取上清液5mL氮 气吹干”（不用添加伊维菌素内标），分别加人1mL不同浓度含内标的标准工作液（4.9），超声溶解残 渣，过0.22um滤膜（4.11）后，配置成基质标准工作液，临用时现配。 4.11微孔滤膜：有机系，0.22μm。 5仪器与设备 5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源（ESI)。 5.天平：感量为0.0001g和0.01mg。 5.3冷冻离心机：转速不低于8000r/min。 5.4旋涡混匀器。 5.5超声波清洗器。 5.6氮吹仪。 6试样制备与保存 6.1试样制备 文本为准 6.1.1饲料：从所取样品中取出具有代表性样品适量，磨碎混匀后，装入洁净的塑料袋中，样品数量 15g，密封，并标记。 6.1.2血液：动物血液用肝素钠抗凝采血管收集，样品数量15mL，密封，并标记。 6.2试样保存 饲料常温保存，待检血液试样于4℃保存，留存血液试样于一18℃冷冻保存。 7分析步骤 7.1提取 7.1.1 血液 称取2.0g（精确到0.01g）试样和0.5g氯化钠（4.4）于50mL离心管中，加人40μL的伊维菌素同 位素内标中间储备液（4.8,相当于伊维菌素同位素内标质量为4ng）3mL水和10mL乙睛（4.1），旋涡 混匀2min，振荡提取30min，以8000r/min在10℃以下条件冷冻离心5min，取上清液5mL氮气吹 干，加入1.0mL乙睛（4.1），超声溶解残渣，过0.22μm滤膜（4.11）后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定和 确证。 7.1.2饲料 称取2.0g（精确到0.01g）试样和3.0g氯化钠（4.4）于50mL离心管中，加入40μuL的伊维菌素同 位素内标中间储备液（4.8，相当于伊维菌素同位素内标质量为4ng）、7.5mL水和10mL乙睛（4.1），旋 涡混匀2min，振荡提取30min，以8000r/min在10℃以下条件冷冻离心5min，取上清液5mL氮气 吹干，加入1.0mL乙（4.1），超声溶解残渣，过0.22μm滤膜（4.11）后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定 和确证。 2