SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4778—2017 出口花粉中链霉素和双氢链霉素的测定方法 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of streptomycin and dihydrostreptomycin in pollen for export- LC-MS/MS method 行业标准信息服务平台 2017-05-12发布 2017-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4778—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：黄娟、刘艳、柳菌、李静静、姜珊、陈惠兰、殷耀、张晓燕、丁涛。 行业标准信息服务平台 1 SN/T 4778—2017 出口花粉中链霉素和双氢链霉素的测定方法 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了出口花粉中链霉素和双氢链霉素的液相色谱-质谱/质谱法测定方法 本标准适用于出口松花粉、玉米花粉、茶花粉、葵花粉、油菜花粉和杂花粉等中链霉素和双氢链霉素 的测定和确证。 2 规范性文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 样品中的链霉素和双氢链霉素经提取溶液提取，三氯甲烷沉淀样品中的蛋白质，清液过C1s小柱净 化后用液相色谱-质谱/质谱法测定。外标法定量。 4试剂和材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，水采用GB/T6682中规定的一级水。 4.1 甲醇：高效液相色谱级。 业标准信息服务 4.2 磷酸。 4.3 叔丁基甲基醚。 4.4 甲酸：高效液相色谱级。 正已烷。 4.5 4.6 三氯甲烷。 4.7 乙酸铵：CH.CO2NH4，高效液相色谱级 4.8 庚烷磺酸钠（C,H15SO,Na)。 4.9 磷酸钠[Na:PO（H2O)12] 4.10提取溶液：准确称取10.1g庚烷磺酸钠（4.8），4.1g磷酸钠（4.9），用水溶解并转移至1000mL容 量瓶中，加5mL磷酸（4.2），用水定容至刻度。 4.11叔丁基甲基醚-正已烷溶液（4十1，体积比）：准确量取400mL叔丁基甲基醚（4.3），加人100ml 正已烷（4.5），混合均匀 4.12甲酸溶液（5%，体积比）：准确量取5mL甲酸（4.4），加人至1000mL容量瓶中，用水定容至 刻度。 4.130.02mol/L乙酸铵溶液：准确称取1.54g乙酸铵（4.7），用水溶解并转移至1000mL容量瓶中， 用水定容至刻度。 1 SN/T 4778—2017 4.14甲醇水溶液（3+7，体积比）：准确量取300mL甲醇，加人700mL水，混合均匀。 于或等于98%。 4.16双氢链霉素标准品[DihydrostreptomycinSesquisulfateHydrate，（C2HN,Oi2）2：（H2SO）， CASNo:5490-27-7]纯度大于或等于99%。 4.17标准储备液：分别准确称取适量的链霉素、双氢链霉素标准品，用甲醇水溶液（4.14）配制成浓度 为1mg/mL的标准储备溶液。0℃～4℃保存 4.18混合标准中间溶液：分别准确移取一定体积的链霉素、双氢链霉素标准储备液（4.17），用甲醇水 溶液（4.14）稀释为10μg/mL，0℃~4℃保存。 4.19混合标准工作液：准确移取一定体积的混合标准中间溶液（4.18），用甲醇水溶液（4.14）稀释成 1.0uμg/mL,现用现配。 4.20Cis小柱：500mg，3mL，或相当者。 4.21 微孔滤膜：水相，0.45μm。 5仪器和设备 5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2分析天平：感量分别为0.01g和0.01mg。 5.3高速离心机：8000r/min。 5.4超声振荡器。 5.5涡旋混合器。 5.6氮吹仪。 5.7具塞塑料离心管：50mL。 5.8 3SPE固相萃取装置。 6试样制备和保存 取有代表性的样品约500g，用磨碎机全部磨碎并通过20目筛，混匀，均分成两份作为试样，分别装 人洁净的容器内，密封，标明标记，于常温下保存。 在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 信息服务平 7分析步骤 7.1样品处理 7.1.1提取 称取2g试样（精确到0.01g）置于50mL具塞塑料离心管中，加入提取溶液（4.10)20mL，三氯甲 烷3mL，于涡旋混匀器上混合3min，混合均匀后置于超声振荡器中超声15min，8000r/min高速离 心5min。取上层清液收集于塑料离心管中，供净化用。 7.1.2净化 将C18小柱（预先用5mL甲醇，5mL水活化）连接于20mL塑料针筒下，将样液以1滴/s～2滴/s 的流速全部通过Cis小柱，在样液在小柱上还剩约2mL左右时，加人5mL水以1滴/s～2滴/s的流速 2