ICS 67.050 SN B45/B46 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5115—2019 进出口食用动物、饲料中卡巴氧测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of carbadox in edible animal and feeds for import and export-LC-MS/MS method 2019-09-03发布 2020-03-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T 5115—2019 前言 本标准依据GB/T1.1一2009起草。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国深圳海关、深圳市检验检疫科学研究院 本标准主要起草人：刘建利、林黎、罗耀、史卫军、牛娜、孙洁、廖立珊、曹琛福、张彩虹、杨俊兴、 沈金灿、张毅、吕建强、花群义、秦智锋 业标准信息服务平台 SN/T 5115—2019 进出口食用动物、饲料中卡巴氧测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了进出口食用动物、饲料中卡巴氧及其代谢物喹嗯啉-2-羧酸残留量的液相色谱-串联质 谱测定方法。 本标准适用于进出口猪、鸡、鱼等饲料中卡巴氧，食用动物猪、牛、羊、鸡、鸭等血液中卡巴氧代谢物 喹嗯啉-2-羧酸残留量的液相色谱-串联质谱测定方法的测定和确证。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 动物血液样品通过加人蛋白酶水解，盐酸酸化，离心过滤后，分别用乙酸乙酯和磷酸缓冲溶液提取， 过OasisMAX固相萃取柱净化。用2%甲酸-乙酸乙酯溶液洗脱，氮吹尽干，用0.1%甲酸-乙腈溶液溶 解残渣，样液供液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。 饲料样品经0.1%甲酸-乙睛溶液提取、离心，加人固相萃取填料净化，取上清液氮吹尽干，定容、过 膜，供液相色谱质谱测定，外标法定量。 4试剂 除另有说明外，所用试剂均为优级纯，实验用水应符合GB/T6682中规定的一级水。 4.1乙睛：色谱纯。 4.2 甲醇：色谱纯 4.3 甲酸：分析纯。 4.4浓盐酸：分析纯。 4.5乙酸乙酯：分析纯。 4.6 磷酸二氢钾：分析纯。 4.7磷酸氢二钾：分析纯。 4.8氢氧化钠：分析纯。 4.9 9Tris缓冲溶液：0.2mol/L，pH=9.6。称取24.2gTris碱，用900mL水溶解，用盐酸调节pH= 9.6定容至1L。 4.10Protease蛋白酶：50mg/mL。4℃保存。 1 SN/T 5115—2019 4.110.1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g氢氧化钠，用水溶解并定容至1L。 4.120.1%甲酸溶液：准确吸取1mL甲酸，用水定容至1L，混匀。 4.130.1mol/L磷酸盐缓冲溶液（pH=7.0）：13.6g磷酸二氢钾和17.4g磷酸氢二钾，用水溶解，用氢 氧化钠溶液调节PH=7.0,定容至1L。 4.140.2mol/L乙酸盐缓冲溶液（PH=5.2）：2.52g乙酸，12.95g乙酸钠溶解于800mL水中，用氢氧 化钠溶液调节PH=5.2,加水定容至1L。 4.152%甲酸-乙酸乙酯溶液：取10mL甲酸，用乙酸乙酯定容至500mL。 4.160.1%甲酸-乙睛溶液（9+1，体积比）：量取10mL乙睛和90mL0.1%甲酸溶液，混匀。 4.17固相萃取填料组合：C18200mg，氯化钠1g，无水MgSO41g，混合均匀。 4.18卡巴氧、喹嗯啉-2-羧酸、喹嗯啉-2-羧酸-d4标准物质：纯度≥99%。见附录A。 4.19标准储备液：100mg/L。准确称取适量标准物质，分别用甲醇溶解定容，配成100mg/L的标准 储备液，在一18℃以下保存，可使用1年。 4.20混合标准工作溶液：根据灵敏度和使用需要，用空白样品提取液配成不同浓度（ug/L）的混合标 准工作溶液，在4℃保存，可使用1周。 4.21同位素内标储备溶液：100mg/L。准确称取适量喹嗯啉-2-羧酸-d4标准物质，分别用甲醇溶解定 容，配成100mg/L的标准储备液，在一18℃以下保存，可使用1年。 4.22同位素内标工作溶液（10ng/mL）：将上述同位素内标储备溶液用甲醇进行适当稀释。 4.23OasisMAX固相萃取柱：500g，3mL，或相当者。 4.24分散固相萃取填料：分别称取C18200mg、氯化钠1g和无水MgSO41g置于15mL离心管中。 4.25滤膜：0.22um，有机相型。 5仪器 5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 标准信息服务平台 5.2 固相萃取装置。 5.3离心机：最大转速不小于9500r/min。 5.4 吹氮浓缩仪。 5.5旋涡振荡器。 5.6 酸度计。 5.7 聚丙烯离心管：15mL和50mL，具塞。 5.8 移液枪，10-1000μL,10-100μL,1000-5000μL。 6测定步骤 6.1食用动物血液类 6.1.1提取 称取2mL（精确至0.01g）试样至50mL离心管中，加人适量内标，加人8mL0.1mol/LTris溶液 （4.9），混匀后，再加入100μL蛋白酶溶液（4.10），充分混勾后置于45℃水浴摇床中振摇2小时。然后 冷至室温，加人1.0mL浓HCl（4.4），振荡均匀，9500r/min离心5min，取上清液加入12mL乙酸乙酯 （4.5），振荡20min，离心5min，取上清液至另一洁净的15mL离心管中，45℃氮吹尽干，取出，加3ml 2