ICS 65.020 SN B 43 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5113—2019 进出口食用动物、饲料中肤喃测定 液相色谱-质谱/质谱法和液相色谱法 出版 Determination of nitrofuran antibiotics in edible animals and feeds for importand export- 标准信息服务平台 2019-09-03发布 2020-03-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5113—2019 前言 本标准依据GB/T1.1一2009要求的规则起草。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国天津海关。 本标准主要起草人：赵祥平、王飞、柴铭骏、李淑静、杨爽、张俊哲、赵丹、刘洋。 业标准信息服务平台 SN/T5113—2019 进出口食用动物、饲料中呋喃测定 液相色谱-质谱/质谱法和液相色谱法 1范围 本标准规定了进出口食用动物血清、尿液中硝基喃代谢物的液相色谱-质谱/质谱测定方法和饲 料中呋喃的液相色谱测定方法。 本标准适用于进出口动物血清（牛、猪、鸡）、尿液（牛、猪）中硝基味喃代谢物的测定，饲料（配合饲 料、预混合饲料、浓缩饲料）中呋喃的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（neqISO3696：1987，MOD） 3方法原理 血样、尿样样品中的硝基呋喃代谢物，前处理采用在酸性条件下进行水解，同时用2-硝基苯甲醛进 行过夜衍生化，经乙酸乙酯溶液提取后，用液相色谱-质谱/质谱法测定，内标法进行定量。 饲料样品中的呋喃，前处理采用乙提取，浓缩定容后，用液相色谱法测定，外标法进行定量。 4试剂和材料 4.1甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正已烷、甲酸：色谱纯。 4.22-硝基苯甲醛、三水合磷酸氢二钾：分析纯。 4.3乙酸铵：色谱纯。 4.4二甲基亚矾：分析纯。 4.5标准物质：呋喃西林原药（CAS编码59-87-0，分子量198.14，分子式C.H.NO.）、呋喃唑酮原药 （CAS编码67-45-8，分子量225.16，分子式C.H,O,N）、呋喃他酮原药（CAS编码139-91-3，分子量 324.33，分子式Ci3H16N,O）、呋喃妥因原药（CAS编码67-20-9，分子量238.16，分子式C.H.N.O.）标 准物质，纯度≥98%。 4.6标准物质：呋喃西林代谢物（CAS编码57-56-7，分子量75.07，分子式CHN3O）、呋喃唑酮代谢物 量201.22，分子式CgH15N.O3）、味喃妥因代谢物（CAS编码2827-56-7，分子量151.55，分子式 C3H.CIN.O2）标准物质，纯度≥98%。 4.71mol/L盐酸溶液的配制：移取浓盐酸16.9mL，用水定容至200ml。 4.80.1mol/LK,HPO溶液的配制：称取K,HPO4：3H,O11.4g，以水溶解，定容至500mL。 4.95mol/L的NaOH溶液的配制：称取NaOH100g，以水溶解，定容至500mL。 1 SN/T 5113—2019 4.10衍生化试剂的配制：37.8mg2-硝基苯甲醛溶于5ml二甲基亚矾,现用现配。 4.1110%乙睛-水溶液：量取10mL乙睛与90mL水，混匀。 4.122%甲酸：量取2mL甲酸与98mL水，混匀。 4.13甲醇一0.5mmol/L乙酸铵溶液（20：80，V/V）：称取38.5mg乙酸铵，用水稀释并定容至 800mL，然后加人200mL甲醇，混匀。 4.15味喃原药类标准储备液：0.1mg/mL。准确称取适量的标准物质（4.5），用乙睛分别配成 0.1mg/mL的标准储备溶液，在一18℃避光保存。 4.16喃代谢物类标准储备液：0.1mg/mL。准确称取适量的标准物质（4.6），用甲醇分别配成 0.1mg/mL的标准储备溶液，在一18℃避光保存。 4.18呋喃代谢物类标准工作溶液：根据需要吸取标准储备溶液（4.16），用甲醇稀释定容至刻度。 4.19滤膜：0.22μm，有机相滤膜。 5仪器 5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2液相色谱仪：配有紫外检测器。 5.3分析天平：感量0.01g.0.0001g。 5.4走 超声波清洗器。 5.5固相萃取装置。 5.6氮气浓缩仪。 5.7离心机：转速大于等于4000r/min 5.8水浴恒温振荡器。 标准信 6样品的制备与保存 6.1试样的制备 对于血样和尿样，取离心后上清，混合均匀，分装标记。对于饲料样品则取代表性样品1kg，四分 *服务平台 法缩减，取约200g，经粉碎，过0.45mm孔筛，混匀分装磨口瓶。在制样的操作过程中，应防止样品受 到污染或发生目标物含量的变化。 6.2试样的保存 将分装后的血样、尿样试样于一18℃保存，饲料4℃冷藏。 7测定步骤 7.1提取 血样或尿样：解冻后，离心，取1g（精确至0.01g）上清于15mL离心管中，加人0.5mL1mol/L盐 酸溶液（4.7），0.3mL衍生化试剂（4.10）。37℃水浴振荡16小时，避光。衍生化完毕后，分别加入 0.1mL5mol/L的NaOH溶液（4.9），1mL0.1mol/L的K,HPO4溶液（4.8）和4mL的乙酸乙酯，涡 旋30s，4000r/min，离心5min，取出上层的乙酸乙酯层，备用；再向溶液中加入4ml的乙酸乙酯，涡旋 2