SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4744—2017 进出口食用动物性激素残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of sexhormone residues of live animal for import and export- HPLC-MS/MS 行业标准信息服务平台 2017-05-12发布 2017-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4744—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：赵孔祥、娄婷婷、张俊哲、杨爽、王玉玲。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4744—2017 进出口食用动物性激素残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了进出口食用动物雄激素，孕激素和雌激素残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法 本标准适用于出人境检验检疫工作中食用动物牛、羊、猪血清及尿中雄激素（群勃龙、勃地酮、雄烯 二酮、诺龙、美雄酮、睾酮、甲基睾酮、康力龙），孕激素（炔诺酮、21α-羟孕酮、17α-羟孕酮、炔诺孕酮、甲羟 孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲羟孕酮、孕酮）和雌激素（雌三醇、雌二醇、雌酮、已烯雌酚、己 二烯雌酚、已烷雌酚）的测定。 2 方法提要 试样中的目标化合物经酶解过夜，甲醇溶液提取，石墨碳黑柱-氨基柱串联富集净化，液相色谱-串 联质谱仪测定，内标法定量 3规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 4试剂与材料 4.1 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 标准信息服务 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 乙：色谱纯。 4.4 甲酸：色谱纯。 4.5 乙酸：优级纯。 4.6 二氯甲烷：色谱纯。 β葡萄糖醛酸酶/硫酸酯酶溶液：≥100000U/mL 4.8 乙酸钠。 4.9 乙酸钠缓冲溶液（pH5.2)：溶解43.0g乙酸钠（NaAc·4HzO)于900mL水中.用乙酸调节pH到5.2 最后用水稀释至1L。 4.10甲醇-水溶液（50+50体积比）：取50mL甲醇和50mL水混合。 4.11甲醇-水溶液（30+70，体积比）：取30mL甲醇和70mL水混合。 4.12 二氯甲烷-甲醇溶液（90+10，体积比）：取90mL二氯甲烷和10mL甲醇混合。 4.130.1%甲酸水溶液：量取甲酸1mL加水稀释至1000mL。 4.140.02%氨水水溶液：量取氨水200μL加水稀释至1000mL。 4.15 石墨碳黑固相萃取柱：500mg，6mL或相当者，使用前依次用5mL二氯甲烷-甲醇溶液（4.12）， 1 SN/T4744—2017 5mL甲醇，5mL甲醇-水溶液（4.11）活化 4.16NH²固相萃取柱：500mg，6mL或相当者，使用前用5mL二氯甲烷-甲醇溶液（4.12）活化。 4.17标准物质：群勃龙、勃地酮、雄烯二酮、诺龙、美雄酮、睾酮、甲基睾酮、康力龙、炔诺酮、21α-羟孕 酮、17α-羟孕酮、诺孕酮、甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲羟孕酮、孕酮、雌三醇、雌二 醇、雌酮、已烯雌酚、已二烯雌酚、已烷雌酚纯度≥95%，化合物信息参见附录A中表A.1。 酮-"d、醋酸甲地孕酮-"d、孕酮-"d 4.19标准储备液：准确称取适量的标准品及同位素内标，以甲醇稀释成1.0mg/mL的储备液，4℃冰 箱保存，有效期为3个月。 4.20混合内标工作液：用甲醇将同位素标准储备液稀释成200.0ug/L的混合标准工作液。 4.21混合标准工作液：根据需要用甲醇-水溶液（4.10）依次稀释成适当浓度的混合标准序列，内标浓度 为 10 μg/L。 4.22微孔滤膜：有机系，0.22μm。 5仪器和设备 5.1液相色谱仪-串联质谱仪，配备电喷雾离子源。 5.2电子天平，感量力0.0001g和0.01g。 5.3氮吹仪。 5.4涡旋混合器。 5.5恒温振荡器。 5.6离心机，最高转速不小于10000r/min。 5.7 pH计。 5.8[ 固相萃取装置。 行业标准 6分析步骤 6.1 试样制备 6.1.1血清 6.1.2尿样 采集动物尿样，于4℃，8000r/min离心10min后，上清分装于小管加盖密封，2℃~8℃冷藏 保存。 6.2试样处理 6.2.1样品的提取 称取试样1g（精确到0.01g）于50mL离心管中，加入50μL混合内标工作液（4.20），加10mL乙 酸钠缓冲溶液（4.9），加人100μLβ葡萄糖醛酸酶/硫酸酯酶溶液，37℃士1℃酶解过夜。加人15mL 甲醇，超声提取30min，10000r/min离心5min，转移上清液转移至另一离心管中，加水至50mL， 10000r/min离心5min，过滤，待净化。 2