SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4675.16—2016 出口葡萄酒中富马酸的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of fumaric acid in wine for export- LC-MS/MS method 行业标准信息服务平台 2016-12-12发布 2017-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4675.16—2016 前言 SN/T4675《出口葡萄酒品质分析方法》共分为30个部分： SN/T 4675.1 出口葡萄酒中甘油的测定酶法； SN/T 4675.2 出口葡萄酒中2,3-丁二醇的测定气相色谱法； SN/T 4675.3 出口葡萄酒中乙醇稳定碳同位素比值的测定； -SN/T 4675.4 出口葡萄酒中乳酸的测定酶法； SN/T4675.5 出口葡萄酒中有机酸的测定离子色谱法； -SN/T4675.6 出口葡萄酒中葡萄糖、果糖和蔗糖的测定； SN/T 4675.7 出口葡萄酒中乙醛的测定气相色谱-质谱法； SN/T 4675.8 出口葡萄酒中5-羟甲基糠醛的测定液相色谱法； SN/T 4675.9 出口葡萄酒中二甘醇的测定气相色谱-质谱法； SN/T 4675.10 出口葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定液相色谱-质谱/质谱法； SN/T 4675.11 出口葡萄酒中7种花色苷的测定超高效液相色谱法； SN/T 4675.12 出口葡萄酒中溶菌酶的测定液相色谱法； SN/T 4675.13 出口葡萄酒中2，4，6-三氯苯甲醚残留量的测定气相色谱-质谱法； SN/T 4675.14 出口葡萄酒中纳他霉素的测定液相色谱-质谱/质谱法； SN/T 4675.15 出口葡萄酒中水杨酸、脱氢乙酸和对氯苯甲酸的测定液相色谱法； SN/T 4675.16 出口葡萄酒中富马酸的测定液相色谱-质谱/质谱法； SN/T 4675.17 出口葡萄酒中丁基锡含量的测定气相色谱-质谱/质谱法； SN/T 4675.18 出口葡萄酒中 二硫代氨基甲酸酯残留量的测定顶空气相色谱法； SN/T 4675.19 出口葡萄酒中钠、镁、钾、钙、铬、锰、铁、铜、锌、砷、硒、银、镉、铅的测定； SN/T 4675.20 出口葡萄酒中稀土元素的测定电感耦合等离子体质谱法； SN/T 4675.21 出口葡萄酒中可溶性无机盐的测定离子色谱法； SN/T 4675.22 出口葡萄酒中总二氧化硫的测定比色法； SN/T 4675.23 出口葡萄酒及葡萄汁中氨氮的测定连续流动分析仪法； SN/T4675.24 出口葡萄酒福林-肖卡指数的测定分光光度计法； SN/T 4675.25 出口葡萄酒颜色的测定CIE1976（L*a*b*）色空间法； SN/T 4675.26 出口葡萄酒浊度的测定散射光法； SN/T 4675.27 出口葡萄酒碱性灰分的测定； SN/T 4675.28 出口葡萄酒细菌、霉菌及酵母的计数； SN/T4675.29 出口葡萄酒中酒香酵母检验实时荧光PCR法； 出口葡萄酒中拜氏接合酵母检验实时荧光PCR法。 SN/T4675.30 本部分为SN/T4675的第16部分 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检 疫局。 本部分主要起草人：陈章庭、汪侃晨、席静、方晓明、杨振宇、倪昕路、樊彦莉、章孟凡、陈婷、王诚、 郭德华、刘青、李志勇。 1 SN/T4675.16—2016 出口葡萄酒中富马酸的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 SN/T4675的本部分规定了葡萄酒中富马酸的液相色谱-质谱/质谱检测方法。 本部分适用于葡萄酒中富马酸的检测 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 样品中富马酸用流动相提取，高速离心后（或过滤膜），供液相色谱/串联质谱检测，外标法定量。 4试剂和材料 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：色谱纯。 4.2甲酸：色谱纯。 4.3甲酸溶液（0.1%）：1000mL水中加人1mL甲酸（4.2）。 4.4标准物质：富马酸（CAS编号：110-17-8）：纯度99.5%。 4.5标准储备液（1.0mg/mL）：准确称取50.7mg富马酸标准品（4.4）于50mL容量瓶中，用甲醇溶解 并定容至刻度。该溶液在4℃下避光保存.可使用3个月。 4.6 标准中间液（10uL/mL）：准确移取0.50mL富马酸标准储备液（4.5）于50mL容量瓶中，用流动 相稀释并定容至刻度，得到浓度为10μg/mL。该溶液在4℃下避光保存，可使用3个月。 4.7标准工作溶液：准确移取适量富马酸标准中间液（4.6）于50mL容量瓶中，用流动相定容至刻度， 摇匀，得到浓度分别为0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.30μg/mL.0.50μg/mL、0.80μ/mL、1.0μ/mL 5.0μg/mL。该溶液在4℃下避光保存，可使用3个月。 4.8针式滤器（0.22μm亲水PTFE)或类似滤器。 4.9 910mL容量瓶。 5仪器和设备 5.1超高效液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾电离源（ESI）。 5.2天平感量0.1 mg。 5.3漩涡振荡器。 1 SN/T 4675.16—2016 5.4离心机：8000r/min。 5.5移液器：1mL。 5.6水平振荡器。 超声波清洗器。 6分析步骤 6.1试样制备 起泡葡萄酒需预先脱气。将100mL试样倒入带排气塞的瓶中，在室温下使用水平振荡器或超声 波水浴脱气，直至无气体逸出。 6.2提取 准确移取1mL试样于洁净的10mL容量瓶中，用流动相[6.3.1b)定容至10.0mL。若样液呈浑 浊，以8000r/min左右离心5min。上清液经0.22μm滤器（4.8）过滤，滤液作为待测样液。 6.3测定条件 6.3.1 液相色谱条件 a) 色谱柱：T3色谱柱：2.1mm×50mm，粒径1.8μm，或相当者； b) 流动相：甲醇+0.1%甲酸溶液（4.3）=1.5+98.5，等度洗脱； c) 流速：200μL/min； d) 柱温：30℃； e) 进样量：5μL。 6.3.2质谱条件 a) 离子化模式：电喷雾电离（ESI-)负离子模式； 质谱扫描方式：多反应监测（MRM）； c) 其他参考质谱条件参见附录A。 6.4液相色谱-质谱/质谱测定 6.4.1 定性测试 被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同的试验条件下，样品中待测物质的保留时间与 标准溶液中对应的保留时间偏差在土2.5%之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标 准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表1规定的范围，则可判定样品中存在对 应的待测物 表1定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >50% >20%~50% >10%~20% <10% 允许的相对偏差 ±20% ±25% %08千 %09千 6.4.2定量测试 依次测定标准系列工作液，绘制峰面积对标准溶液浓度的标准工作曲线，用标准曲线对样品进行定 2