SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4675.10—2016 出口葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of ochratoxin A in wine for exportLC-MS/MS method 行业标准信息服务平台 2017-07-01实施 2016-12-12发布 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4675.10—2016 前言 SN/T4675《出口葡萄酒品质分析方法》共分为30个部分： SN/T 4675.1 出口葡萄酒中甘油的测定酶法； SN/T 4675.2 出口葡萄酒中2,3-丁二醇的测定气相色谱法； SN/T 4675.3 出口葡萄酒中乙醇稳定碳同位素比值的测定； -SN/T 4675.4 出口葡萄酒中乳酸的测定酶法； SN/T4675.5 出口葡萄酒中有机酸的测定离子色谱法； -SN/T 4675.6 出口葡萄酒中葡萄糖、果糖和蔗糖的测定； SN/T 4675.7 出口葡萄酒中乙醛的测定气相色谱-质谱法； SN/T 4675.8 出口葡萄酒中5-羟甲基糠醛的测定液相色谱法； SN/T 4675.9 出口葡萄酒中二甘醇的测定气相色谱-质谱法； SN/T 4675.10 出口葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定液相色谱-质谱/质谱法； SN/T 4675.11 出口葡萄酒中7种花色苷的测定超高效液相色谱法； SN/T 4675.12 出口葡萄酒中溶菌酶的测定液相色谱法； SN/T 4675.13 出口葡萄酒中2，4，6-三氯苯甲醚残留量的测定气相色谱-质谱法； SN/T 4675.14 出口葡萄酒中纳他霉素的测定液相色谱-质谱/质谱法； SN/T 4675.15 出口葡萄酒中水杨酸、脱氢乙酸和对氯苯甲酸的测定液相色谱法； SN/T 4675.16 出口葡萄酒中富马酸的测定液相色谱-质谱/质谱法； SN/T 4675.17 出口葡萄酒中丁基锡含量的测定气相色谱-质谱/质谱法； SN/T 4675.18 二硫代氨基甲酸酯残留量的测定顶空气相色谱法； 出口葡萄酒口 SN/T 4675.19 出口葡萄酒中钠、镁、钾、钙、铬、锰、铁、铜、锌、砷、硒、银、镉、铅的测定； SN/T 4675.20 出口葡萄酒中稀土元素的测定电感耦合等离子体质谱法； SN/T 4675.21 出口葡萄酒中可溶性无机盐的测定离子色谱法； SN/T 4675.22 出口葡萄酒中总二氧化硫的测定比色法； SN/T 4675.23 出口葡萄酒及葡萄汁中氨氮的测定连续流动分析仪法； SN/T4675.24 出口葡萄酒福林-肖卡指数的测定分光光度计法； SN/T 4675.25 出口葡萄酒颜色的测定CIE1976（L*a*b*）色空间法； SN/T 4675.26 出口葡萄酒浊度的测定散射光法； SN/T 4675.27 出口葡萄酒碱性灰分的测定； SN/T 4675.28 出口葡萄酒细菌、霉菌及酵母的计数； SN/T4675.29 出口葡萄酒中酒香酵母检验实时荧光PCR法； 出口葡萄酒中拜氏接合酵母检验实时荧光PCR法。 SN/T4675.30 本部分为SN/T4675的第10部分 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫 局、中华人民共和国广东出人境检验检疫局。 本部分主要起草人：江侃晨、陈章庭、刘晓茂、杨振宁、倪昕路、李响、宋青、秦宇雯、陈婷、王诚、 郭德华、刘青、李志勇。 1 SN/T4675.10—2016 出口葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本部分适用于葡萄酒中赭曲霉毒素A的检测 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 样品采用缓冲溶液稀释后，经氢氧化钠溶液调节试样至中性，再经免疫亲和柱净化，最后由液相色 谱-串联质谱仪检测，外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：色谱纯。 行业标准信 4.2 乙腈：色谱纯。 4.3 乙酸：色谱纯。 4.4 碳酸氢钠。 氯化钠。 4.5 4.6 氢氧化钠。 4.7 乙酸铵。 4.8 乙腈溶液（50%）：移取乙腈（4.2)100mL，用水稀释至200mL 4.9 乙酸溶液（0.1%）：移取乙酸（4.3)1.0mL，用水稀释至11。 4.10 缓冲溶液：准确称取10g碳酸氢钠（4.4）和75g氯化钠（4.5），用水溶解并定容至500mL。 4.11 氢氧化钠溶液（2%）：准确称取20g氢氧化钠（4.6），用水溶解并定容至1Ls 4.12 乙酸铵溶液（0.2mol/L）：称取15.4g乙酸铵固体（4.7），用水溶解并定容至1L。 4.13乙酸甲醇溶液（2%）：移取乙酸（4.3)2.0mL，用甲醇（4.1）稀释至100mL。 4.14标准物质：赭曲霉毒素A（OchratoxinAOTACAS编号：303-47-9）：10.01mg/L，存储条件及有 效期参照标准物质证书。 4.15标准中间液（200μg/L）：移取适量体积的赭曲霉毒素A（4.14）于10mL容量瓶中，用乙睛（4.8） 定容至刻度线。该溶液在4℃下避光保存，有效期一个月。 1 SN/T4675.10—2016 释并定容至刻度。标准工作系列浓度分别为1ug/L、5ug/L、10ug/L、15ug/L和20ug/L。标准工作 溶液现配现用。 4.17免疫亲和柱：填料体积（0.3mL）。 4.18滤膜：0.22μm，有机系。 5仪器和设备 5.1超高效液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。 5.2天平：感量0.1 g、0.1 mg。 5.3 pH计。 5.4漩涡振荡器。 5.5离心机：8000r/min。 5.6 固相萃取装置。 5.7 固相萃取柱空柱管连接头。 5.8 固相萃取柱空柱管（15mL）。 5.9 氮吹仪。 5.10 超声波清洗器。 5.11 水平振荡器。 6 分析步骤 6.1试样制备 起泡葡萄酒需预先脱气。将100mL试样倒人带排气塞的瓶中，在室温下使用水平振荡器或超声 波水浴脱气，直至无气体逸出。 6.2提取 准确吸取10mL试样于洁净的50mL带刻度塑料离心管中，加入2.5mL缓冲溶液（4.10）于漩涡 混合器（5.4）上混匀，通过氢氧化钠溶液（4.11)调节试样pH至6.9~7.1，待用。如有沉淀则用离心机以 8 000 r/min离心 5min。 6.3净化 试样（6.1)和免疫亲和柱（4.17)置于20℃以上房间，放置室温 于固相萃取装置（5.6）上，转移提取后的试样（6.2）到空柱管（5.8）中，使试样（6.2）以不超过2mL/min 的流速缓慢通过免疫亲和层析柱，待试样完全流尽后，用20mL乙酸铵溶液（4.12）分两次淋洗免疫亲 和柱，待淋洗液流尽后，将柱内残留液体吹干，弃去全部流出液。用乙酸甲醇溶液（4.13)1mL洗脱，收 集洗脱液于玻璃刻度试管中，重复洗脱操作一次，如洗脱液体积超过2mL，可氮吹后用乙酸甲醇溶液 （4.13）定容至2.0mL，过0.22μm滤膜，供高效液相色谱测定。 6.4测定条件 6.4.1液相色谱条件 a）色谱柱：Cis色谱柱：2.1mm×50mm，粒径1.9μm，或相当者； b) 流动相：A，甲醇；B0.1%乙酸水溶液（4.8）；洗脱程序见表1； 2