SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4523—2016 出口葡萄酒中多种非法色素的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of various illegal pigment in grape wine for export- LC-MS-MS method 行业标准信息服务平台 2016-06-28发布 2017-02-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4523—2016 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国吉林出人境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人：张勋、马书民、李玲、张代辉、牟峻、黄志强、张帆、李升、陈光宇、周晓、邢燕燕、 赵锰慧、谢萍。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4523—2016 出口葡萄酒中多种非法色素的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了出口葡萄酒中酸性橙、酸性黄、酸性红、苏丹I、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹V、碱性橙、罗丹 明B的液相色谱-质谱/质谱检测方法。 本标准适用于红葡萄酒和白葡萄酒中酸性橙、酸性黄、酸性红、苏丹I、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹IV、碱 性橙、罗丹明B的测定和确证。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 3方法提要 液体试样经乙睛提取旋转蒸发至干定容后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定和确证，外标法定量。 试剂和材料 4 4.1 对试剂和材料的要求 本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯；水为GB/T6682规定的一级水。 业标准信息服务平台 4.2试剂和材料 4.2.1 甲醇：色谱纯。 4.2.2 甲酸：色谱纯。 4.2.3 乙腈：色谱纯。 4.2.4 ：氯化钠：分析纯。 4.2.5 盐酸：分析纯。 4.2.6 氢氧化钠：分析纯。 4.2.7 盐酸溶液：10mL，用水定容到100mL 4.2.8 氢氧化钠溶液：10g，用水定容到100mL。 4.2.9 0.1%甲酸水溶液：1mL甲酸用水定容到1000mL。 4.2.10 乙十水（9十1，体积比）：900mL乙睛与100mL水混合。 4.2.11标准物质：酸性橙（OrangeCAS号633-96-5,C1HuN,NaO,S）、酸性黄（Metanilyellow，CAS 号587-98-4CisH14N.NaO.S)、酸性红（Azophloxine.CAS号3734-67-6,Ci:Hi:N.NaO.S2）、苏丹I (SudanI,CAS号842-07-9,C1Hi2N,O)、苏丹II（SudanII,CAS号3118-97-6,C1:HiN,O)、苏丹IⅢI 1 SN/T4523—2016 (SudanI，CAS号85-86-9,C22HrN,O）、苏丹IV（SudanIV，CAS号85-83-6,C24H,OH,O）、碱性橙 (BasicOrange 31,CAS号97404-02-9,Cn H14 CINs）、罗丹明B（Basic rose red,CAS 号81-88-9, C2:Hs1CIN.O）纯度均大于等于97%。 贮备液，在0℃～4℃冰箱中保存，有效期3个月。 4.2.13标准工作溶液：根据需要用乙睛十水（9十1，体积比）稀释配制适当浓度的标准工作液，现用现配。 5仪器与设备 5.1液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI)。 5.2振荡器。 5.3超声波发生器。 5.4天平：感量0.1mg和0.01g。 5.5 离心机：最大转速10000r/min以上。 5.6涡旋混合器。 5.7离心管：50mL，聚丙烯，具塞 5.8 移液器：1000μL、100μL。 5.9 旋转蒸发仪。 6样品制备 6.1试样制备 将所取原始样品1kg在瓷混样桶内充分混匀，气泡酒先超声脱气，再将混匀样品分装置洁净容器 内密封，作为试样，标明标记。 6.2 试样保存 试样于0℃4℃保存。在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生含量的变化。 7测定步骤 7.1 红葡萄酒、白葡萄酒样品的提取和净化 移取10g（精确到0.1g)试样于50mL聚四氟乙烯离心管内，加人5g氯化钠，用盐酸溶液将pH 值调至4，加人20mL乙，涡旋混匀1min，超声提取10min，10000r/min离心5min，上层全部提取 液转移至鸡心瓶中，残渣再用氢氧化钠溶液将pH值调至9，加入20mL乙睛，重复上述操作，合并两次 提取液，38℃水浴旋蒸至尽干，用乙睛-水（9：1，体积比）溶解，定容至10mL，冷冻离心后，取1mL供 液相色谱-质谱/质谱仪测定。 7.2液相色谱-质谱/质谱条件 7.2.1 色谱柱：Cs，50mm×1.7mm（内径），粒度5.0μm或相当者。 7.2.2柱温：30℃。 7.2.3 进样量：10μL。 7.2.4流动相：A：0.1%甲酸水，B：乙，C:水，梯度洗脱见表1。 7.2.5 流速：0.30mL/min。 2