SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4520—2016 出口动物源食品中硝呋索尔代谢物 残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of residue of nifursol metabolites in foodstuffs of animal origin for exportLC-MS/MS method 行业标准信息服务平台 2016-06-28发布 2017-02-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4520—2016 前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准负责起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国厦门出人境检验检 疫局。 本标准主要起草人：王传现、张缙、宋青、刘夏、王芳、任硕、方晓明、李晓虹、徐敦明。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4520—2016 出口动物源食品中硝索尔代谢物 残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了动物源性食品中硝味索尔的代谢物3，5-二硝基水杨酰耕残留量（3，5-dinitrosalicylic acidhydrazine，简称DNSAH)的液相色谱-质谱/质谱（LC-MS/MS)测定与确证方法。 本标准适用于猪肉、鸡肉、鸡肝、猪肝、龙虾、草虾、肠衣、鳗鱼、蜂蜜中硝呋索尔代谢物残留量的测定 和确证。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 试样中的硝呋索尔代谢物在酸性条件水解，在37℃下用2-硝基苯甲醛衍生16h，调节pH为7.0~ 7.5后，用乙酸乙酯提取，提取液用正已烷脱脂后，供LC-MS/MS测定，外标法定量。 4 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：液相色谱级。 标准信息服务平台 4.2 乙：液相色谱级。 4.3 乙酸乙酯：液相色谱级。 4.4 正已烷：液相色谱级。 4.5 浓盐酸：含量为36%~38%。 4.6 氢氧化钠。 4.7 磷酸氢二钠。 4.8 2-硝基苯甲醛。 4.9 二甲亚。 4.10 乙酸铵。 4.11 盐酸溶液：1.0mol/L。准确量取90mL浓盐酸（4.5），用水定容至1L。 4.12 氢氧化钠溶液：1.0mol/L。准确称取40g氢氧化钠（4.6），用水溶解并定容至1L。 4.13 磷酸氢二钠溶液：0.1mol/L。准确称取12g磷酸氢二钠（4.7），用水溶解并定容至1L。 4.142-硝基苯甲醛溶液：7.55mg/mL。准确称取75.5mg2-硝基苯甲醛（4.8），用1mL二甲亚矾 （4.9）溶解，乙睛定容至10mL中，现配现用。 4.15 乙酸铵溶液：5mmol/L。准确称取385.4mg乙酸铵（4.10），用水溶解并定容至1L。 1 SN/T4520—2016 4.16乙晴饱和的正已烷：准确量取100mL正已烷（4.4），加人10mL乙睛（4.2），充分混勾，静置后取 出上层液体，备用。 4.17定溶液：乙酸铵溶液-乙腈（8+2），准确量取80mL5mmol/L乙酸铵溶液（4.15），加人20mL乙 腈（4.2），充分混匀，备用。 4.18硝呋索尔代谢物标准品：3,5-二硝基水杨酸肼（DNSAH)，CAS号：955-07-7，纯度大于或等于99%。 4.19标准储备液的配制（0.1mg/mL）：称取约10mg（士0.1mg）的DNSAH标准品于100mL容量瓶 中，用适量乙溶解，并用乙睛定容，配成0.1mg/mL标准储备溶液。一18℃避光保存，有效期为 6个月。 4.20标准中间溶液的配制：吸取DNSAH标准储备液（4.19），用乙睛稀释至终浓度为100.0μg/L， 4℃以下避光保存，有效期为3个月。 4.21标准工作液的配制：根据需要，临用时吸取一定量的标准中间溶液（4.20），用乙睛稀释配制成不 同浓度的系列标准工作溶液，浓度分别为0.5μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L、5.0μg/L、10μg/L、20μg/L、 50μg/L，4℃以下避光保存，有效期1个月。 4.22有机相滤膜：0.2um。 4.23中性氧化铝：74μm~149μm（100目~200目）。 5仪器与设备 5.1 液相色谱-质谱/质谱仪，配有电喷雾（ESI)离子源。 5.2 涡旋混合器。 5.3恒温振荡器。 5.4天平：感量0.1mg和0.01g。 5.5离心机：4000r/min。 5.6 高速离心机：15000r/min。 5.7氮吹仪。 5.8 3pH计。 6试样制备与保存 6.1 猪肉、鸡肉、鸡肝、猪肝、龙虾、草虾、鳗鱼 取代表性样品约500g，将其可食部分先切碎，再用绞肉机绞碎，混匀，装人洁净容器内密封，做好标 记，于一18℃以下冷冻存放。 6.2肠衣 盐渍肠衣样品先用剪刀剪成小于5mm宽的小段，分出0.5kg作为试样，用清水洗去盐分，再用蒸 馏水冲洗，在丝网器皿上摊开沥去水分5min。制备好的试样置于样品袋中，密封，并做好标记，于 一18℃以下冷冻存放。 万 6.3蜂蜜 取有代表性样品约500g。对于无结晶的样品将其搅拌均匀：对于有结晶析出的样品，在密闭情况 下，将样品置于不超过60℃的水浴中温热，待样品全部融化后搅拌均匀，迅速冷却至室温。在融化时必 须注意防止水分挥发。装入洁净容器作为试样，密封并做好标记，于4℃以下冷藏存放。 注：在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生待测物含量的变化。 2