SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4519—2016 出口动物源食品中利巴韦林残留量的 测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of ribavirin residue in foodstuffs of animal origin for export- LC-MS/MS method 行业标准信息服务平台 2016-06-28发布 2017-02-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4519—2016 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局、中华人民共和国东山出人境检验检疫 局、中华人民共和国厦门出人境检验检疫局、中华人民共和国绍兴出人境检验检疫局、福建圣农发展股 份有限公司。 本标准主要起草人：刘正才、杨方、潘迎芬、林永辉、陈旭东、徐敦明、任明兴、吕小玲。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4519—2016 出口动物源食品中利巴韦林残留量的 测定液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了动物源食品中利巴韦林残留量的液相色谱-质谱/质谱的测定方法 本标准适用于鸡肉、肝脏、肾、蛋、猪肉、鳗鱼、虾等动物源食品中利巴韦林残留量的测定和确证。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 试样中残留的利巴韦林代谢物经酸性磷酸酯酶水解成利巴韦林原药，与样品中残留的利巴韦林原 药一起，经三氯乙酸-乙晴混合溶液提取，经苯硼酸固相萃取小柱净化，液相色谱-质谱/质谱进行测定， 同位素内标法定量。 4试剂和材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1 甲醇：色谱纯。 业标准信 4.2 乙睛：色谱纯。 4.3 甲酸：色谱纯。 4.4 三氯乙酸。 4.5 氨水：含量为25%~28%。 4.6 乙酸铵：色谱级纯 酸性磷酸酯酶（phosphataseacid,fromwheatgerm，活力：≥0.4unit/mg，CAS号：9001-77-8）。 4.8 酸性磷酸酯酶溶液（100μg/mL）：准确称取酸性磷酸酯酶（4.7)5mg，置50mL容量瓶中，用水溶 解并稀释至刻度，摇匀，配制成100μg/mL的酶解液，4℃～8℃冰箱中保存。 4.9 9三氯乙酸溶液（20g/L，pH4.8）：称取20g三氯乙酸，加水约950mL使其溶解，用氨水调pH至 4.8（±0.1），再加水定容至1000mL。 8mL水加人90mL的甲醇中，混匀后备用。 4.11乙酸铵缓冲溶液（2.0mol/L，pH4.8）：称取乙酸铵77.0g，加水约450mL使其溶解，用乙酸调 pH至4.8（土0.1），再加水定溶至500mL。 4.12乙酸铵缓冲溶液（0.25mol/L，pH8.5）：称取乙酸铵9.06g，加水约450mL使其溶解，用氨水调 pH至8.5（±0.1），再加水定容至500mL。 1 SN/T 4519—2016 4.13标准物质：利巴韦林（ribavirin；CAS号：36791-04-5），纯度大于98.0%。 4.14同位素内标标准物质：利巴韦林-13Cs纯度大于99.0%。 4.15标准储备液（100μg/mL）：准确称取利巴韦林标准品（4.13）10mg（精确至0.1mg），置100mL容 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成100μg/mL的标准储备液，一18℃冰箱中保存，有效 期为1年。 4.16标准中间液（1.0μg/mL）：用移液管吸取标准储备液（4.15）1mL置100mL容量瓶中，用甲醇稀 释至刻度，摇匀得到1.0μg/mL标准中间液，置4℃～8℃冰箱中保存，有效期为3个月。 4.17内标储备液：准确称取利巴韦林-13Cs标准品（4.14)10mg（精确至0.1mg），置100mL容量瓶中， 用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成100μg/mL的内标标准储备液，一18℃冰箱中保存，有效期为 1年。 4.18内标中间溶液（1.0μg/mL）：移取1.00mL的内标标准储备液（4.17）至100mL容量瓶中，用甲醇 稀释至刻度，置4℃～8℃冰箱中保存，有效期为3个月。 4.19标准工作液：临用时根据需要，移取适量的标准中间溶液（4.16）和内标中间溶液（4.18），用乙稀 释至合适浓度，使用前配制。 4.20PBA苯硼酸固相萃取小柱：100mg/3mL，或相当者；使用前依次用3mL乙睛，3mL乙睛-1%甲 酸（体积比，3：1），3mL乙酸铵缓冲溶液（4,12）活化，并保持柱体湿润。 注：可采用商品化的BondElutPBA固相萃取小柱[BondElutPBA，partNo:12102127,USA]，或等同性能的其他 小柱。 4.21滤膜：0.22μm，有机系。 5仪器和设备 5.1 液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾电离（ESI）源。 5.2天平：感量0.1mg和0.01g。 组织捣碎机。 5.3 5.4高速冷冻离心机：转速≥8000r/min 5.5 离心机：5000r/min。 5.6漩涡振荡器。 5.7 pH计。 5.8氮吹仪。 5.9 固相萃取装置。 6试样制备与保存 6.1试样制备 肌肉、肝脏、肾放入组织捣碎机均质，充分混匀，均分成两份，分别装人清洁容器内，并标明标记；蛋 类，虾去壳后取可食部分后放入组织捣碎机均质，充分混勾，均分成两份，分别装人清洁容器内，并标明 标记。 制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化 6.2试样保存 2