SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4675.14—2016 出口葡萄酒中纳他霉素的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of natamycin in wine for export-LC-MS/MS method 行业标准信息服务平台 2017-07-01实施 2016-12-12发布 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4675.14—2016 前言 SN/T4675《出口葡萄酒质量安全分析方法》共分为30个部分： SN/T 4675.1 出口葡萄酒中甘油的测定酶法； SN/T 4675.2 出口葡萄酒中2,3-丁二醇的测定气相色谱法； SN/T 4675.3 出口葡萄酒中乙醇稳定碳同位素比值的测定； -SN/T 4675.4 出口葡萄酒中乳酸的测定酶法； SN/T4675.5 出口葡萄酒中有机酸的测定离子色谱法； -SN/T 4675.6 出口葡萄酒中葡萄糖、果糖和蔗糖的测定； SN/T 4675.7 出口葡萄酒中乙醛的测定气相色谱-质谱法； SN/T 4675.8 出口葡萄酒中5-羟甲基糠醛的测定液相色谱法； SN/T 4675.9 出口葡萄酒中二甘醇的测定气相色谱-质谱法； SN/T 4675.10 出口葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定液相色谱-质谱/质谱法； SN/T 4675.11 出口葡萄酒中7种花色苷的测定超高效液相色谱法； SN/T 4675.12 出口葡萄酒中溶菌酶的测定液相色谱法； SN/T 4675.13 出口葡萄酒中2，4，6-三氯苯甲醚残留量的测定气相色谱-质谱法； SN/T 4675.14 出口葡萄酒中纳他霉素的测定液相色谱-质谱/质谱法； SN/T 4675.15 出口葡萄酒中水杨酸、脱氢乙酸和对氯苯甲酸的测定液相色谱法； SN/T 4675.16 出口葡萄酒中富马酸的测定液相色谱-质谱/质谱法； SN/T 4675.17 中丁基锡含量的测定气相色谱-质谱/质谱法； 出口葡萄酒 SN/T 4675.18 二硫代氨基甲酸酯残留量的测定顶空气相色谱法； SN/T 4675.19 出口葡萄酒中钠、镁、钾、钙、铬、锰、铁、铜、锌、砷、硒、银、镉、铅的测定； SN/T 4675.20 出口葡萄酒中稀土元素的测定电感耦合等离子体质谱法； SN/T 4675.21 出口葡萄酒中可溶性无机盐的测定离子色谱法； SN/T 4675.22 出口葡萄酒中总二氧化硫的测定比色法； SN/T 4675.23 出口葡萄酒及葡萄汁中氨氮的测定连续流动分析仪法； SN/T4675.24 出口葡萄酒福林-肖卡指数的测定分光光度计法； SN/T 4675.25 出口葡萄酒颜色的测定CIE1976（L*a*b*）色空间法； SN/T 4675.26 出口葡萄酒浊度的测定散射光法； SN/T 4675.27 出口葡萄酒碱性灰分的测定； SN/T 4675.28 出口葡萄酒细菌、霉菌及酵母的计数： SN/T4675.29 出口葡萄酒中酒香酵母检验实时荧光PCR法； 出口葡萄酒中拜氏接合酵母检验实时荧光PCR法。 SN/T4675.30 本部分为SN/T4675的第14部分 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出人境检验检疫 局、中华人民共和国广东出入境检验检疫局。 本部分主要起草人：崔淑华、程刚、刘萤、张雪琰、李正义、王宇、赵峰、刘青、李志勇。 1 SN/T4675.14—2016 出口葡萄酒中纳他霉素的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本部分适用于葡萄酒中纳他霉素的测定。 规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 样品经稀释，高速离心后，用液相色谱-质谱/质谱仪测定并确证，外标法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1乙腈：色谱纯。 4.2甲酸。 4.35 5%乙睛-0.1%甲酸溶液：准确量取50mL乙腈、1mL甲酸，用水定容至1L，混勾后备用。 4.40.1%甲酸-水溶液：准确量取1mL甲酸，用水定容至1L，混匀后备用。 4.5 纳他霉素标准品（CAS编号7681-93-8，分子量：665.73）：纯度≥89.9%。 4.6纳他霉素标准储备溶液：准确称取适量纳他霉素标准品，用甲醇配制成浓度为1.0mg/mL的标准 储备液。 4.7纳他霉素标准中间溶液：准确吸取适量的纳他霉素标准储备溶液（4.6），用5%乙睛-0.1%甲酸溶液 （4.3)配制成浓度为10μg/mL的标准中间溶液。 4.8纳他霉素标准工作溶液：准确吸取适量的纳他霉素标准中间溶液（4.7），用5%乙睛-0.1%甲酸溶液 （4.3)逐级稀释纳他霉素标准中间溶液，配制成0.2μg/L～100μg/L系列标准工作溶液 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱-质谱/质谱仪：三重四极杆串联质谱，配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2 分析天平：感量0.01mg。 5.3 涡旋混合器。 5.4离心机：配2mL角转子，转速不低于15000r/min。 5.5 5具塞离心管：50mL、2mL。 1 SN/T 4675.14—2016 6测定步骤 6.1样品处理 检测前，将葡萄酒样品充分摇匀后，起泡酒需事先脱气。将100mL试样倒人带排气塞的瓶中，在 室温下使用水平振荡器或超声波水浴脱气，直至无气泡逸出。 准确量取5mL试样于50mL棕色容量瓶中，用5%乙腈-0.1%甲酸溶液（4.3）定容至刻度，混匀 后，将溶液移人2mL离心管中，15000r/min离心5min后，取上清液，待液相色谱-质谱/质谱测定。 6.2测定 6.2.1液相色谱参考条件 色谱柱：C1s柱，100mmX2.1mm（内径），粒径1.8μm，或相当者； a) b) 流动相：A（乙睛）,B（0.1%甲酸水溶液）。梯度洗脱条件见表1； 表1液相色谱洗脱条件 时间/min A/% B/ % 0.0 5 95 0.5 5 95 3.5 06 10 5.0 90 10 5.1 5 95 7.0 5 95 c) 进样量：10μL； 柱温：30℃； e) 流速：0.3mL/min。 标准信息服务平 6.2.2 液相色谱-质谱/质谱参考条件 离子源：电喷雾离子源（ESI）； a) b) 扫描方式：正离子扫描； c) 监测方式：多反应监测（MRM）； d）其它质谱参考条件参见附录A中表A.1和表A 6.2.3液相色谱-质谱/质谱测定 按照确定的液相色谱-串联质谱条件测定样品和标准工作溶液（4.8），响应值均应在仪器检测的线 性范围内，以色谱峰面积按外标法定量。在上述仪器条件下，纳他霉素的参考保留时间为3.0min。液 相色谱-串联质谱多反应监测色谱图参见附录B图B.1。 6.2.4定性确证 按照上述条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的色谱峰保留时间与标准工作溶液一致，允许偏 差小于土2.5%；定性离子对的相对丰度与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超 2