SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4319—2015 出口水产品中微囊藻毒素的检测 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of microcystins in aquatic products for exportLC-MS/MS method 行业标准信息服务平台 2015-09-02发布 2016-04-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4319—2015 前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国海南出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：徐志伟、徐彬、林正锋、程立媛、王玉健、李实飞、黄冬妮。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4319—2015 出口水产品中微囊藻毒素的检测 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了出口水产品中微囊藻毒素（microcystins）的液相色谱-质谱/质谱测定方法 本标准适用于鱼、虾中微囊藻毒素的液相色谱-质谱/质谱法测定和确证。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。 3方法提要 定量。 4试剂和材料 所有试剂除特殊注明外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：色谱纯。 4.2 乙腈：色谱纯。 4.3 3甲酸。 4.4 0.1%甲酸（体积比）溶液：量取1mL甲酸和999mL水，混合均匀。 4.5 20%甲醇（体积比）溶液：量取20mL甲醇和80mL水，混合均匀。 4.6 80%甲醇（体积比）溶液：量取80mL甲醇和20mL水，混合均匀。 4.7标准品：微囊藻毒素-LR（microcystin-LR，CAS号：101043-37-2，分子式：C4gH74NioO12）、微囊藻毒 素-RR(microcystin-RR,CAS号：111755-37-4，分子式：C4H7sNO12）、微囊藻毒素-YR（microcystin YR，CAS号：101064-48-6，分子式：C52H72N1O13），纯度均大于等于95%。 4.8微囊藻毒素标准储备液：准确称取适量每种微囊藻毒素标准品，用甲醇（4.1）配制成浓度为约 100μg/mL的标准储备液。此储备液可在一20℃下避光保存1年。V 4.9微囊藻毒素标准中间液：取适量标准储备液（4.8），用甲醇稀释成含微囊藻毒素LR、微囊藻毒素 RR、微囊藻毒素-YR均为1μg/mL的标准中间液。此中间液可在一20℃下避光保存3个月 4.11基质标准工作溶液：根据需要在使用前用空白基质溶液配制。 4.12固相萃取柱：HLB,60mg，3mL或相当者。使用前依次用3mL甲醇、3mL水活化，保持柱 体湿润。 4.13微孔滤膜：0.22μm，有机系。 1 SN/T 4319—2015 5仪器和设备 5.1液相色谱仪-串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI)。 5.2分析天平。 5.3粉碎机。 5.4涡旋混合器。 5.5冷冻离心机。 5.6氮气浓缩仪。 6试样制备和保存 从所取全部样品中取出有代表性样品，取可食部分约500g，用粉碎机充分捣碎均匀。制备好的试 样存放于密封洁净容器中，于一20℃避光冷冻存放。 7测定步骤 7.1提取 称取2g试样（精确至0.01g），置于50mL具塞聚丙烯离心管中，加人10mL甲醇，3000r/min涡 旋混匀2min，4℃下以8500r/min离心5min，上清液转移至玻璃试管中，40℃下氮气吹至约1mL， 加水9mL，混匀，转移至另一50mL具塞聚丙烯离心管中。原玻璃试管中再加人1mL甲醇，9mL水， 混勾，转移至同一50mL具塞聚丙烯离心管中，混合均匀后4℃下以8500r/min离心5min。 7.2净化 将7.1中得到的上清液以小于1mL/min的流速通过HLB固相萃取柱（4.12），待样液全部流出后， 用3mL水和6mL20%甲醇溶液（4.5）淋洗，弃去全部流出液，用80%甲醇溶液（4.6）洗脱并定容至 2mL刻度试管。过0.22am微孔滤膜（4.13），供液相色谱-串联质谱仪分析。 7.3测定 7.3.1 色谱条件 色谱参考条件如下： 服务平台 a) b) 流速:0.45 mL/min; c) 柱温：50℃； 进样量：40μL； e) 流动相：乙睛-0.1%甲酸（4.4）溶液，梯度洗脱程序见表1。 表1 梯度洗脱条件 时间/min 乙腈/% 0.1%甲酸溶液/% 0 20 80 4 60 40 2