SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4259—2015 出口水果蔬菜中链格孢菌毒素的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of alternaria toxins residues in fruit and vegetables for export-LC-MS/MS method 行业标准信息服务平台 2015-05-26发布 2016-01-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4259—2015 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国陕西出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：李建华、何强、孔祥虹、邹阳、张璐、李莹、付骋宇。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4259—2015 出口水果蔬菜中链格孢菌毒素的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了水果和蔬菜中链格孢霉素、链格孢酚、腾毒素、链格孢酚甲醚四种链格孢菌毒素含量 的液相色谱-串联质谱检测方法。 本标准适用于苹果、梨、葡萄、猕猴桃、柑桔、西红柿、黄瓜、白菜、辣椒等样品中链格孢霉素、链格孢 酚、腾毒素、链格孢酚甲醚含量的测定和确证。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 试样中的链格孢菌毒素用乙腈提取后，经聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱串联氨基固相萃 证，外标法定量。 4 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。 标准信息服务平 4.1 乙腈：HPLC级。 4.2 甲醇：HPLC级。 4.3 二氯甲烷。 4.4 乙酸乙酯。 4.5 环已烷。 4.6 甲酸。 4.7 氯化钠。 4.8 无水硫酸钠：650℃灼烧4h，贮于密封容器中备用。 4.9 乙酸乙酯-环已烷（1+1，体积比）：量取1000mL乙酸乙酯与1000mL环已烷混合均匀。 4.10 甲醇-水溶液（1十4，体积比）：量取100mL甲醇与400mL水混合均匀。 4.11甲酸-甲醇-乙酸乙酯溶液（0.5+50+50.体积比）：量取100mL甲醇、100mL乙酸乙酯、1mL甲 酸混合均匀。 4.12乙-水溶液（1十1，体积比）：量取100mL乙睛与100mL水混合均匀。 4.13链格孢霉素标准物质（Altenuene，CisHi.O，CAS：29752-43-0）：纯度大于等于99.0%。 4.14链格孢酚标准物质（Alternariol,C4H1。Os，CAS：641-38-3）：纯度大于等于98.5%。 1 SN/T4259—2015 4.15腾毒素标准物质（Tentoxin，C22HsoN,O4，CAS：28540-82-1）：纯度大于等于99.5%。 4.16链格孢酚甲醚标准物质（Alternariolmonomethyl-ether，CisHizO，，CAS26894-49-5）：纯度大于 等于99.0%。 4.17标准储备溶液：准确称取适量的链格孢霉素、链格孢酚、腾毒素、链格孢酚甲醚，分别用乙睛制成 100μg/mL的标准储备溶液，0℃~4℃保存。 4.18混合标准工作溶液：分别取适量的链格孢霉素、链格孢酚、腾毒素、链格孢酚甲醚标准储备液，根 据需要用乙睛-水溶液（4.12）逐级稀释，配制成适当浓度的标准工作溶液。0℃～4℃保存。 4.19聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱：HLB柱，60mg，3mL或相当者。使用前依次用3mL 甲醇、5mL水活化，保持柱体湿润。 4.20氨基固相萃取柱：500mg，3mL。使用前在柱上端装填约2cm高的无水硫酸钠（4.8），然后用 5mL二氯甲烷活化，保持柱体湿润。 4.21 微孔滤膜：0.2um，有机系。 5仪器和设备 5.1液相色谱-串联质谱仪：配有ESI电离源、串联四级杆质量分析器。 5.2凝胶渗透净化系统。 5.3分析天平：感量0.01mg、0.01g。 5.4组织捣碎机。 5.5振荡器。 5.6 离心机：转速不低于3000r/min。 固相萃取装置，带真空泵。 减压旋转蒸发器。 5.9氮吹仪。 5.10具塞离心管：50mL。 5.11 浓缩瓶：50mL、100mL。 6试样制备与保存 取代表性样品约500g，将其可食用部分切碎后，用组织捣碎机将样品加工成浆状，混勺，装人洁净 的容器内，密闭并标明标记，于－18℃冷冻保存。不 息服务平台 注：在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化 7测定步骤 7.1提取 7.1.1苹果、梨、葡萄、猕猴桃、柑桔、西红柿、黄瓜、白菜 称取5g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加入4g氯化钠，10mL水，15mL乙腈，振荡提 取10min，3000r/min离心5min，将上层乙提取液转移到浓缩瓶中。再分别用15mL乙睛重复提 取两次，合并乙睛提取液，于40℃水浴中减压浓缩至近干，氮气吹干，用1.0mL甲醇溶解残渣，再用 9.0mL水稀释，过滤，待净化。 2