SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T3994—2014 动物产品中肠出血性大肠杆菌 O104：H4检疫技术规范 Quarantine protocol for Enterohemorrhagic Escherichia coli O104 : H4 in animal product 行业标准信息服务平台 2014-11-19发布 2015-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3994—2014 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院、中华人民 共和国天津出入境检验检疫局 本标准主要起草人：杨俊兴、陶虹、唐金明、花群义、阮周曦、吕建强、林庆燕、王玉玲、曹琛福、谢晓露、 刘建利、廖立珊。 行业标准信息服务平台 1 SN/T3994—2014 动物产品中肠出血性大肠杆菌 0104：H4检疫技术规范 1范围 本标准规定了动物产品中肠出血性大肠杆菌（EnterohemorrhagicEscherichiacoli，EHEC） O104：H4的检疫技术规范。 本标准适用于动物产品中的EHECO104：H4的检测。 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 bp:碱基对 BPW：缓冲蛋白陈水 CT-SMAC:改良山梨醇麦康凯培养基 DNA:脱氧核糖核酸 dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸 E.coli：大肠杆菌V 标准信息服务平台 EHEC:肠出血性大肠杆菌 ELISA：酶联免疫吸附试验 mTSB：改良胰蛋白陈大豆肉汤 PBS:磷酸缓冲液 PCR：聚合酶链式反应 SMAC：山梨醇麦康凯培养基 4设备与材料 4.1主要仪器设备 4.1.1恒温培养箱。 4.1.2均质器：2000r/min~12000r/min。 4.1.3高压灭菌锅。 4.1.4电子天平：精确值0.0001g。 1 SN/T 3994—2014 4.1.5 冷冻离心机。 4.1.6 全自动微生物及药敏分析系统。 4.1.7 生物显微镜， 4.1.8 普通PCR仪。 4.1.9 荧光PCR仪。 4.1.10 电泳分析仪。 4.1.11 水平电泳槽。 4.1.12 pH计。 4.1.13 ELISA洗板机：96孔（8×12）。 4.1.14 酶标仪：适用于96孔（8×12）ELISA板检测，可满足波长450nm使用。 4.2 培养基与试剂 除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，用于PCR的试剂均用无DNA酶污染的容器分装。所 有实验用水均为灭菌双蒸水，应符合GB/T6682中一级水要求。 4.2.1 缓冲蛋白陈水（BPW）：配方见附录A。 4.2.2 改良胰蛋白陈大豆肉汤（mTSB）：配方见附录A。 4.2.3 新生霉素（Novobiocin）。 4.2.4 丝裂霉素C(MitomycinC)。 4.2.5 改良山梨醇麦康凯（CT-SMAC)琼脂：配方见附录A。 4.2.6 改良科玛嘉显色琼脂。 4.2.7 革兰氏染色液：配方见附录A。 4.2.8 荧光PCR试剂盒。 4.2.9 PCR试剂盒。 4.2.10 大肠杆菌诊断血清（包括O104诊断血清及H4诊断血清）。 行业标准信息服务平台 5 操作步骤 5.1 1检测流程 见图1。 2