SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3865—2014 出口保健食品中番茄红素的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination oflycopene inhealthfoods for export- LC-MS/MS method 行业标准信息服务平台 2014-01-13 发布 2014-08-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3865—2014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国重庆出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：陈冬东、存显、王轶亮、李贤良、张雷、唐柏彬、王国民。 行业标准信息服务平台 SN/T3865—2014 出口保健食品中番茄红素的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了保健食品中番茄红素的液相色谱-质谱/质谱检测方法。 本标准适用于番茄红素胶囊中番茄红素的液相色谱-质谱/质谱测定和确证。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 试样经氢氧化钾醇溶液皂化后用1%（质量浓度）2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）的石油醚提取， 提取液经中性氧化铝层析柱净化后，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。 4试剂材料 业标准信息服务平台 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1石油醚：高效液相色谱级。 4.2二氯甲烷：高效液相色谱级。 4.3叔丁基甲醚：高效液相色谱级。 4.4乙睛：高效液相色谱级。 4.5 26-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）：优级纯。 4.6氢氧化钾。 4.7无水乙醇。 4.8溶解液：称取1.0gBHT，用二氯甲烷溶解并定容至100mL。 4.9提取液：称取10.0gBHT，用石油醚溶解并定容至1000mL。 4.10定容液：称取1.0gBHT，用100mL乙睛-石油醚（1+9，体积比）溶解并定容。 4.11 50%氢氧化钾溶液（质量浓度）：称取50.0g氢氧化钾用水溶解并定容至100mL。 4.12番茄红素标准品：CAS：502-65-8，纯度99%，一70℃下贮存。 4.13番茄红素标准储备液：称取适量番茄红素标准品（4.12），用溶解液（4.8）溶解并定容至10mL，番 茄红素浓度为100ug/mL，置于一18℃冰箱避光保存，有效期3个月。 4.14番茄红素标准工作液：根据需要用空白样品提取液将标准储备液（4.13）稀释成0.01μg/mL、 0.05μg/mL、0.10μg/mL、1.0μg/mL.5.0μg/mL、10.0μg/mL的标准工作溶液。 4.15中性氧化铝（75μm～150μm）：105℃干燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g中性氧化铝中加 入2mL水降活，混匀后密封，放置12h后使用。 1 SN/T3865—2014 4.16中性氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞人一薄层脱脂棉，干法装人中性氧化铝（4.15）至3cm高， 轻敲实后加一薄层脱脂棉，用10mL石油醚预淋洗，备用。 4.17微孔滤膜：有机系，0.22μm。 5仪器与设备 5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配大气压化学电离源。 5.2分析天平：感量为0.01g和0.01mg。 5.3旋转蒸发仪。 5.4离心机：转速不低于5000r/min。 5.5旋涡混匀器。 5.6超声清洗器。 5.7 氮吹仪。 恒温水浴锅。 6试样制备与保存 6.1试样制备 随机取同一批的供试品50粒，挤出内容物，用均质器搅拌试样，混匀，装入洁净容器中，密封，并标 明标记。 6.2试样保存 将试样于一70℃下存放。 行业标 73 分析步骤 7.1提取 称取0.5g样品（精确至0.01g）于50mL离心管中.加人5mL无水乙醇（4.7）和3mL氢氧化钾溶 液（4.11)后，旋涡混匀2min，超声10min，置于80℃恒温水浴锅中皂化2h，每10min振摇1次。冷却 至室温后加人提取液（4.9）10mL，振荡提取5min，以5000r/min离心3min，将上清液转移至旋蒸瓶 中，再用提取液10mL重复提取2次，合并提取液，于40℃下旋蒸浓缩近干，用提取液10mL溶解残 渣，待净化。 7.2净化 将待净化液全部转移至经过预淋洗的中性氧化铝层析柱（4.16）中，用10mL石油醚淋洗，抽干后 用10mL溶解液（4.8）洗脱，收集洗脱液，于40℃下氮气吹干，残渣用1.0mL定容液（4.10）溶解，过 0.22um滤膜后，供LC-MS/MS测定。 7.3测定 7.3.1液相色谱-质谱/质谱条件 液相色谱-质谱/质谱条件如下： a）色谱柱：Cls柱，150mm×4.6mm（内径），粒径3.5μm，或相当者； 2